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液相色谱（LC）
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主题：【求助】求助：液相 反相色谱柱问题？

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xuweikuo0
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发表于：2010/08/31 13:53:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
条件：1.C18的反相色谱柱，分析处理甲基丙烯酸酯（MMA），样品中还含有极微量的乙酰半胱氨酸，采用甲醇和水作流动相，样品均溶解在纯水中。每次测样很多，大概有80来个吧。
      2 每次操作也都是将流动相过滤超声后使用。用完后，用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。
      3 因为只是分析甲基丙烯酸酯，标样也就配制了不同浓度的甲基丙烯酸脂。

问题：第一次实验开始用的是新柱子，先做标样MMA，出的峰很漂亮，时间也一致。开始测两样品的时候，出封时间随着测量样品时间的增加，慢慢的会从8min增加到9min。但是峰型还是很尖。
      第二次测试，同样的步骤，但是封出现拖尾，出封时间从9min后移至11min。
      第三次测试，出封在10min，并且基线波动非常大，以至于根本就不能够用了。。

测试的仪器没有控温柱，我怀疑是温度的原因。因为这几天室内温度一只在降低。我只是对MMA进行定量的分析，晚一点点出封，只要和标样时间一致我就觉得可以用的。不知道这样可以不？

关于封拖尾，我觉得是测试时间太长，导致柱效降低。因为第二次试验结束，马上就得第三次实验，我就用5%的甲醇冲洗半小时，再用纯乙晴冲洗一个小时。到第三次实验的时候，峰型图的基线波动十分大的话，我想柱子是不是已经失效了。

我现在想让色谱柱再生。我看了很多再生的资料，都是因为有缓冲盐作流动相后柱子的处理，我样品不含缓冲盐，那么我怎么冲洗改进下更好呢。。。希望大家指点下。。
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duanjiezz
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2010/8/31 14:05:32 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把流速提高些
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有水有渝
xky0230699
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2010/8/31 14:14:54 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？
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xuweikuo0
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2010/8/31 14:52:13 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 duanjiezz(duanjiezz) 发表:
把流速提高些


你好。。我测量时流速都是0.8mL/min。
你的意思是每次提高点流速，出峰时间会缩短是吗？
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xuweikuo0
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2010/8/31 15:08:16 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
甲基丙烯酸酯这东西在水中的溶解度好吗？样品的基质是否复杂，如果复杂，最好加一保护柱，还有一次性做这么多样，后面的样是不是都在下半夜进样了，昼夜温差大吗？


关于溶解度，我计算过，在我样品测试的范围内事全部溶解的。
样品成分不复杂，第一次测试的时候，出峰还是很干净，分析得很清楚的。
但是后来估计是柱子效果下降，峰很乱，基线也不平了。
昼夜温差有1度，我觉得出峰时间后延和温度有一定关系。但是我只需要确定样品出峰在哪，用面积定量就好了，样品多也得连着测完。

谢谢啦~~

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有水有渝
xky0230699
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2010/8/31 22:46:46 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主是自己开发的方法吗，有没有做过耐用性试验，色谱条件是什么，这个样品溶液的稳定性如何，如果基质不复杂，应该污染不大才对。
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1818
xyhdcm2002
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2010/9/1 16:54:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是楼主每次做完样品过后,色谱柱清洗时间不够造成的吧!!
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tjbeik
tjbeik
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2010/9/19 15:53:50 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是做色谱试剂的天津北科化学品有限责任公司，看看你做实验的色谱纯度吧
022-26246351
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21kgtan
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2010/9/19 17:31:29 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果是新柱子，而且流动相不含盐，短时间内就坏掉的可能性不大，但也不排除。只能逐步检查是温度、样品、柱子的问题了
两针之间的时间间隔温度变化应该不大，出峰时间变化大不大？
你在峰型变差以后还有再一次检测标样没？进一针看看有否拖尾
你可以试试将峰型不好的该样品换根柱子跑相同方法
观察一下系统压力变化，拖尾有可能系统或柱子污染
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fobhcff
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2010/9/22 16:23:18 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子产生拖尾，很平常，解决的最简单办法是：安装保护柱，对色谱柱修复起不到关键作用。
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liuyuanzi
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2012/9/18 10:16:02 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
C18反相色谱柱不应该用5%甲醇冲洗，流动相甲醇不应该低于20%
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