紫外可见分光光度计(UV)

主题:【求助】新手使用紫外可见分光光度计的问题。

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shelly009
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厂里买了个thermo的 genesys 10s 的机器,
我不是很会用。 因为手头没有标准溶液,就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
我的操作:
1.配了2个浓度的葡萄糖溶液: A:2.5g/l  和 B:10g/L, (我的初衷是:假设我的标液是A, 测定B的浓度)
2.我把A放进了空白cell,(这机器有6个cell,1个空白,5个sample),B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan:190-1000nm, 结果出来的波形图上有太多峰,不知道选择那个波长。 后来看到好像200nm的时候突然掉下,我就选择了200nm。
4.选择波长200nm,用A做了空白,然后测量B。 结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长,都是一样出错。

请问我该如何设置 和操作才能得到我想要的效果呢?==》假设标液是A, 测定B的浓度
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shelly009
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原文由 shelly009(shelly009) 发表:
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我不是很会用。 因为手头没有标准溶液,就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
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1.配了2个浓度的葡萄糖溶液: A:2.5g/l  和 B:10g/L, (我的初衷是:假设我的标液是A, 测定B的浓度)
2.我把A放进了空白cell,(这机器有6个cell,1个空白,5个sample),B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan:190-1000nm, 结果出来的波形图上有太多峰,不知道选择那个波长。 后来看到好像200nm的时候突然掉下,我就选择了200nm。
4.选择波长200nm,用A做了空白,然后测量B。 结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长,都是一样出错。

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叶子
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shelly009
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原文由 叶子(xiaoanxiaoye) 发表:
我不明白的是你为什么空白里放上A呢?


我以为有个比值关系;  C标:A标=C测:A测
鸿雁
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原文由 shelly009(shelly009) 发表:
厂里买了个thermo的 genesys 10s 的机器,
我不是很会用。 因为手头没有标准溶液,就用葡萄糖溶解到纯水里想按说明书里的方法测一次浓度。
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1.配了2个浓度的葡萄糖溶液: A:2.5g/l  和 B:10g/L, (我的初衷是:假设我的标液是A, 测定B的浓度)
2.我把A放进了空白cell,(这机器有6个cell,1个空白,5个sample),B放进了1号cell。
3.不知道葡萄糖的吸收谱线==我就scan:190-1000nm, 结果出来的波形图上有太多峰,不知道选择那个波长。 后来看到好像200nm的时候突然掉下,我就选择了200nm。
4.选择波长200nm,用A做了空白,然后测量B。 结果显示说超过什么range。。然后试了380nm 500nm 800nm的波长,都是一样出错。

请问我该如何设置 和操作才能得到我想要的效果呢?==》假设标液是A, 测定B的浓度


说明书里没有提到葡萄糖溶液的最大吸收波长吗?建议你还是找一个比较成熟的体系来检测你的仪器吧,比如邻二氮菲-铁体系,它的最大吸收波长在512nm,体系也比较稳定,可以用一下
360918249
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你应该设置葡萄堂的波长,标准上有的,应该是吸光度最大处吧
tutm
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葡萄糖溶液直接测吸光度?好像没这样做的,糖类溶液对光吸收不明显,一般都要加显色剂的,比如酚类试剂。
一般糖溶液浓度的直接测试是使用折光仪,没有用分光光度计直接测试的。
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2010/9/7 17:24:40 Last edit by tutm
Jehovah
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因为A的浓度低,使用外标法,未知样品的吸光度应该在标准样品的最大浓度和最小浓度之间(有的仪器设定为不超出10%),否则测试的结果不可靠。所以有的仪器会告诉你超出范围。
你可以以B为标准来测A的浓度,采用单点过零做校准曲线(不过你要是只是学习还可以,一般标准曲线需要做5点,线性度相关因子大于0.999以上才可信)。另外,你的空白应该是试剂,不知道你的仪器中的2-6是否直接扣除1号空白?如是,请在1号池中放入空白(纯水)。

另外一个注意事项,最好检查一下你的不同的比色皿的吸光度误差。
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2010/9/7 19:46:56 Last edit by jehovah
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