主题：【原创】色谱方法建立岂无凭？——浅谈HPLC方法的建立

原文由 小丑(joker) 发表:

原文由 geebzbz(geebzbz) 发表:
顶！楼主写的很好，也提供了一个很好的交流机会。谢谢了！
我问大家一个简单的问题哈：我目前正在分离细菌发酵产物中的活性物质，用Agilent1200，对于样品的检测波长我怎么确定啊？样品来源是乙酸乙酯萃取后，用水溶解，这个水溶液也做过紫外扫描，可是在190到300这段里边很多很强的吸收峰；如果稀释的话，随着稀释倍数的增加，峰个数不断减少，峰对应的最大波长也不断地蓝移，这样的情况下，我该怎样去确定一个或者几个波长检测的波长呢？因为DAD可同时检测5个波长。谢谢指导了！

严格来说，您分析的样品应为发酵产物乙酸乙酯萃取物，样品中化合物的种类复杂并且有待于定性。此时，本人建议您这样做：二极管阵列检测，采集数据后，在230 nm-400 nm波长范围内，每隔10 nm提取一张色谱图；如果样品溶液有颜色，应在230 nm-800 nm范围内每隔10 nm提取一张色谱图。“DAD同时检测5个波长”，这是采集数据的情况下可同时监测5个波长，实际上在数据后处理部分，您想要哪个波长下的色谱图都可以。还需要在熟悉一下仪器操作啊。

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

原文由 小丑(joker) 发表:

原文由 geebzbz(geebzbz) 发表:
顶！楼主写的很好，也提供了一个很好的交流机会。谢谢了！
我问大家一个简单的问题哈：我目前正在分离细菌发酵产物中的活性物质，用Agilent1200，对于样品的检测波长我怎么确定啊？样品来源是乙酸乙酯萃取后，用水溶解，这个水溶液也做过紫外扫描，可是在190到300这段里边很多很强的吸收峰；如果稀释的话，随着稀释倍数的增加，峰个数不断减少，峰对应的最大波长也不断地蓝移，这样的情况下，我该怎样去确定一个或者几个波长检测的波长呢？因为DAD可同时检测5个波长。谢谢指导了！

严格来说，您分析的样品应为发酵产物乙酸乙酯萃取物，样品中化合物的种类复杂并且有待于定性。此时，本人建议您这样做：二极管阵列检测，采集数据后，在230 nm-400 nm波长范围内，每隔10 nm提取一张色谱图；如果样品溶液有颜色，应在230 nm-800 nm范围内每隔10 nm提取一张色谱图。“DAD同时检测5个波长”，这是采集数据的情况下可同时监测5个波长，实际上在数据后处理部分，您想要哪个波长下的色谱图都可以。还需要在熟悉一下仪器操作啊。

"每隔10 nm提取一张色谱图",是什么意思？说实话我也不懂，期待解释。谢谢

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

原文由 小丑(joker) 发表:

原文由 geebzbz(geebzbz) 发表:
顶！楼主写的很好，也提供了一个很好的交流机会。谢谢了！
我问大家一个简单的问题哈：我目前正在分离细菌发酵产物中的活性物质，用Agilent1200，对于样品的检测波长我怎么确定啊？样品来源是乙酸乙酯萃取后，用水溶解，这个水溶液也做过紫外扫描，可是在190到300这段里边很多很强的吸收峰；如果稀释的话，随着稀释倍数的增加，峰个数不断减少，峰对应的最大波长也不断地蓝移，这样的情况下，我该怎样去确定一个或者几个波长检测的波长呢？因为DAD可同时检测5个波长。谢谢指导了！

严格来说，您分析的样品应为发酵产物乙酸乙酯萃取物，样品中化合物的种类复杂并且有待于定性。此时，本人建议您这样做：二极管阵列检测，采集数据后，在230 nm-400 nm波长范围内，每隔10 nm提取一张色谱图；如果样品溶液有颜色，应在230 nm-800 nm范围内每隔10 nm提取一张色谱图。“DAD同时检测5个波长”，这是采集数据的情况下可同时监测5个波长，实际上在数据后处理部分，您想要哪个波长下的色谱图都可以。还需要在熟悉一下仪器操作啊。

"每隔10 nm提取一张色谱图",是什么意思？说实话我也不懂，期待解释。谢谢

原文由 wdl158160(wdl158160) 发表:
请教一个问题：为什么样品溶剂的洗脱强度明显高于流动相洗脱强度会造成色谱峰分叉？