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液相色谱（LC）
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主题：【求助】帮忙分析下这张色谱图

浏览0 回复24 电梯直达
geebzbz
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发表于：2010/11/18 23:33:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请各位帮我分析下这两张图：
Agilent1200，1ml/min，230nm，样品是柱层析之后的组分
流动相：A—水  B—甲醇
0min          15%A      85%B
8min          15%A      85%B
8.01min      0%A        100%B
13min        0%A        100%B
15min        100%A    0%B

图一：原始上样


图二：三倍上样

而现在我知道，我想要的物质是在后面这个主峰里边。
问题是：
1、后面这个大峰通过改变流动可以得到很好的分离吗？如果是，要如何改变？
2、为什么这个基线会如此的不平稳呢？即使加大量，这个图谱还是很相似的，难道是里边含有太多的含量相对较少的杂质？如果是，这些杂质是如何引进的？
3、就各位经验得来看，用于HPLC的样品，其前处理有什么需要注意的地方？比如，装样品的瓶子要干净的什么程度？每次需要酸啊、碱啊重复洗吗？
4、这个图还有什么需要注意的地方吗？或者说不正常的地方吗？
谢谢各位的指导了。
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2010/11/19 7:24:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉溶液不纯,或是柱子没分开.
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21kgtan
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2010/11/19 8:09:11 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
由方法看图，这图很正常
你的柱子应该是4.6*250mm的吧，柱体积4ml左右，所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇，如果你想知道是不是杂质过多，可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面，只想要后面的物质分离，我建议你在8min那里微调，给一个缓冲时间或者浓度，不要一下子8.01min就由85%升到100%
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2010/11/19 8:12:24 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换根柱子试试
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有水有渝
xky0230699
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2010/11/19 11:18:28 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先进一个对照品看看色谱
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lytion
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2010/11/19 11:33:02 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.就算该条件分离出来时间也需要太多了，而且也会展宽严重
2.走梯度基线是不可能平的（除非用特殊梯度溶剂），看怎么走梯度，往上往下飘都是正常的
3.干净就行了，又不接质谱
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geebzbz
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2010/11/19 13:00:53 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 21kgtan(21kgtan) 发表:
由方法看图，这图很正常
你的柱子应该是4.6*250mm的吧，柱体积4ml左右，所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇，如果你想知道是不是杂质过多，可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面，只想要后面的物质分离，我建议你在8min那里微调，给一个缓冲时间或者浓度，不要一下子8.01min就由85%升到100%


确实是那类型的柱子，那么你们对于梯度洗脱，一般一个梯度会多长时间？或者说，我还想知道一般一次进样跑多长时间啊？
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geebzbz
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2010/11/19 13:06:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lytion(lytion) 发表:
1.就算该条件分离出来时间也需要太多了，而且也会展宽严重
2.走梯度基线是不可能平的（除非用特殊梯度溶剂），看怎么走梯度，往上往下飘都是正常的
3.干净就行了，又不接质谱


嗯，那你觉得我该怎样改变流动相以缩短时间？
还有，我说的基线不平，主要是指5-6min、8-11min这些时间里边为什么不平啊？虽然这个过程是梯度，但在一小部分时间里是流动相是恒定的啊，所以基线应该是平的才对啊，为什么呢？
谢谢！
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〓猪哥哥〓
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2010/11/19 15:20:02 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个是安捷伦的图谱吧。
基线跑的太高了。说实话，非常难看，找不到需要的峰。
为什么起始甲醇那么高，基本上很多东西全部都一起出来，成分之间无分离度可言。
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〓猪哥哥〓
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2010/11/19 15:21:45 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 21kgtan(21kgtan) 发表:
由方法看图，这图很正常
你的柱子应该是4.6*250mm的吧，柱体积4ml左右，所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇，如果你想知道是不是杂质过多，可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面，只想要后面的物质分离，我建议你在8min那里微调，给一个缓冲时间或者浓度，不要一下子8.01min就由85%升到100%


起始的85%，很有可能样品在8min内出峰。
用对照品做一个对照
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geebzbz
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2010/11/20 8:25:07 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:
这个是安捷伦的图谱吧。
基线跑的太高了。说实话，非常难看，找不到需要的峰。
为什么起始甲醇那么高，基本上很多东西全部都一起出来，成分之间无分离度可言。

对，这是安捷伦做的。之所以选择85%甲醇，是因为最开始的时候做过0%-100%的梯度，在前面都没有东西，后来试了几次之后，发现其实在85%差不多就可以了。我的样品是乙酸乙酯提取物，然后还过了柱层析的，所以，极性的话，应该相对比较小了。
基线太高的话，要怎么处理啊？会不会是因为选择参比波长没有选对啊，或者检测器的狭缝啊，或者其他什么的没有设置正确？并且前4min左右，由于是没有样品的的，所以基线很低很平，这更让我矛盾了。多谢指教，多谢指教！
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