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长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和柱塌陷现象,一般建议用5%的有机溶剂+95%的水冲洗,特别是用了缓冲盐的情况下。
请大侠具体解释下这个固定相流失和柱塌陷的原理。我不想知其然而不知其所以然。
反相色谱中固定相通常疏水性都很强,特别是长链烷烃高密度键合的情况下,疏水性更强。在高含水量的流动相环境下,固定相的疏水长碳链倾向于通过互相结合的方式尽量降低表面自由能,固定相的互相结合的结果使填料多孔结构的表面“失湿”,也就是不能很好被流动相润湿了。这个时候,在流动相中的极性待分析物就很难通过吸附扩散等作用接近固定相表面而发生相互作用,色谱保留能力就没有了,就是发生“相塌陷”了,也有人称之为“链折叠”或“固定相倒伏”。
图一所示:(a)是在甲醇水流动相下的碳链形状;(b)是100%水流动相下的碳链形状。
相塌陷会造成保留时间减少、保留时间没有重现性、拖尾程度增加以及梯度再生恢复时间变长等色谱性能变坏的问题。很多因素会影响保留时间减少的速率和程度,包括键合烷基链的类型、键合密度和硅胶孔径。当固定相的键合密度比较低的时候(小于3umol/m2),相塌陷不是个问题,因为残留在硅胶表面的硅醇基能使填料表面被水分子润湿,使烷基链有机会和极性待分析物中的疏水部位发生作用。当键合相是C3之类的短链烷基时,相塌陷也极少发生,因为短链烷基链的体积小,对亲水性的硅醇基的屏蔽作用不明显。
来自极限的解释