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液相色谱（LC）
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主题：【求助】一头雾水的分离纯化，请前辈帮忙~

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lanseliu
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发表于：2010/12/23 12:51:37 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
菌发酵液，过3K超滤膜，取3K以下的滤液过制备液相，目的是找出一种活性物质，但完全不知道这是一种什么物质，有可能是有机酸也有可能是小分子肽，过制备液相用的是甲醇-三氟乙酸，30min甲醇从10%-100%.。用的C18反相柱。出来的峰形很差，分不太开，但基本确定物质在前面4-7分钟左右出来的，极性比较大的物质。请问应该怎样改变条件，让峰形好一些，或者有没有其他的分离纯化思路？谢谢了！！！！
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2010/12/23 16:20:46 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
30分钟的方法，4-7分钟就出来了，保留太小了，看你梯度也挺缓的了。换根柱子试试吧。
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2010/12/23 16:23:35 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你们有极性大柱子吗？
肽应该是含氮化合物吧，知道一款波士顿的色谱柱，分离含氮化合物和大极性化合物很好。 BOSTON CREST PREMIUM ODS 柱，供你参考。
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redrumcha
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2010/12/23 19:51:46 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
恩，可以换根极性强的柱子，或者试试极性更弱的离子对试剂。
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〓猪哥哥〓
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2010/12/23 20:47:30 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
既然是极性的东西，用氯仿，石油醚先除杂纯化后再进液相。制备色谱一般不管峰型，只要分离度足够好就行
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hujiangtao
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2010/12/24 7:59:58 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换极性柱或加离子对
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〓猪哥哥〓
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2010/12/25 10:34:40 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
调整下比例，峰可以在10min左右出峰的。我觉得楼主先应该纯化样品，以免很快污染色谱柱
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小虾米
wuxia330
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2010/12/25 17:53:48 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
换个柱子吧!
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ynmzlixin
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2010/12/28 13:48:12 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分不开，肯定要换填料啊
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阿三
junqiwudi
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2010/12/28 14:23:33 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
发酵液很杂的 楼主没有做前期工作就做液相制备吗？ 估计不是峰型不好，而是杂质太多 根本没分开
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阿三
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2010/12/28 14:27:20 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
发酵产物分离我们也做过 直接液相制备 想都没想过 前期工作量也很大 建议楼主过下凝胶层析柱 效果会有很大改观
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