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液相色谱（LC）

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主题：【求助】岛津工作站自动积分和分离度是否准确可信？

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angelachen

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发表于：2011/01/14 14:51:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

各位液相高手、牛人们好：
我是一个液相菜鸟，初学液相但是要靠它毕业。
现在，要建立一种氨基酸的检测方法。参考了文献和师姐跑18中常规氨基酸的做法，但是效果不好。自己做了改进，跑标样又快又好，跑样品就分不开峰了。于是老师让我用响应曲面法做方法优化，于是我用box-behnken法，选取缓冲盐pH值【6.0、6.4、6.8】和有机相比例【5%、8%、11%】，目标峰的保留时间和与相邻峰的最小分离度为指标。昨晚通宵做了一遍，但是，数据不好。保留时间的模型拟合度还有0.96，分离度的就只有0.65了。。

岛津工作站自动算的分离度很诡异，想请教一下大家，究竟分离度怎么算的呀？

啊，为什么图上看起来明明就没分开，峰尾连着个小峰，但是分离度有2.159；有一个分离得不错，但是分离度有23.9？这也太大了吧？而且很诡异的是，明明是同样两个峰，我求它们的分离度，但每个峰都有一个分离度，而且数值还不一样，不能理解啊不能理解，于是优化出来的结果，分离度的模型拟合度才0.65，完全不行。。

大家都是这么做方法优化的啊？选什么因素，以及什么指标来考察分离方法的优劣啊？

设备：岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
色谱条件：
Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ℃；检测波长246nm（师姐和文献都用254 nm，但我发现246的峰会比254的高，具体用多少，打算再做一次全扫描看看）；进样量10μL 。

流动相A：0.1 mol/ L 醋酸钠—乙腈(体积比为97∶3) 溶液;

流动相B：乙腈—水(体积比为4∶1) 溶液。

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2011/1/14 15:14:52 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 angelachen(angelachen) 发表:
......

设备：岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
色谱条件：
Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ℃；检测波长246nm（师姐和文献都用254 nm，但我发现246的峰会比254的高，具体用多少，打算再做一次全扫描看看）；进样量10μL 。

流动相A：0.1 mol/ L 醋酸钠—乙腈(体积比为97∶3) 溶液;

流动相B：乙腈—水(体积比为4∶1) 溶液。

Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧，色谱柱没有那么粗的（或长的）吧

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2011/1/14 18:11:04 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 yueer(yueer) 发表:
原文由 angelachen(angelachen) 发表:
......

设备：岛津高效液相色谱仪,其中包括LC210ATvp 泵两台、SPD210Avp 紫外检测器1 台、CBM-10Avp 系统控制器1 台。
色谱条件：
Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 柱温38 ℃；检测波长246nm（师姐和文献都用254 nm，但我发现246的峰会比254的高，具体用多少，打算再做一次全扫描看看）；进样量10μL 。

流动相A：0.1 mol/ L 醋酸钠—乙腈(体积比为97∶3) 溶液;

流动相B：乙腈—水(体积比为4∶1) 溶液。

Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×416 mm ) , 应该是Kromasil C18色谱柱(5 μm ,200 mm ×4.6 mm ) 吧，色谱柱没有那么粗的（或长的）吧