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主题：【求助】FITC用LIF检测器为什么不出峰？

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hpnewer
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发表于：2011/01/16 11:29:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
Beckman P-ACE MDQ的仪器，
实验条件：运行缓冲液是0.06M的磷酸氢二钠溶液，样品是单纯的FITC，浓度很小，就在进样瓶里放了2颗FITC固体。看起来有很强的荧光。
仪器条件：10kv和20kv的电压都试过，488nm激发，520nm发射，两个通道Relay都是off（不知这是啥意思），运行时间从15-25min都试过。但是为什么没有峰出来。
请教高人解答。谢谢啦
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hpnewer
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2011/1/16 11:36:29 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有人在线吗？
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sunpengwjh
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2011/1/17 20:10:32 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
之前有冲柱子么？试下反向电压！
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2011/1/17 20:14:02 Last edit by sunpengwjh
ericwong
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2011/1/18 11:22:13 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
进样瓶里放了2颗FITC固体？
什么意思呢？
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katherine7
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2011/1/18 16:41:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
之前有冲柱子么？试下反向电压！

在这里，反向电压怎么个用，冲柱子。用什么溶液来反向冲洗，缓冲液？
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2011/1/18 17:42:20 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ericwong(ericwong) 发表:
进样瓶里放了2颗FITC固体？
什么意思呢？


就是放了两粒固体FITC，没有具体称重量，估计在0.1mg左右。在进样瓶中全部溶解的
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poplar_yang
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2011/1/20 3:07:01 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
两个通道Relay都是off - should be on
运行时间从15-25min都试过 - should be less than 20min
该帖子作者被版主 sunpengwjh加 2积分， 2经验，加分理由：积极讨论！
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heguang
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2011/1/28 12:21:03 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看起来你的实验有点是乱做的。
荧光素钠的标准样我们通常用的都是10-6到10-7M作为样品的。
在高pH条件下，荧光素会被EOF带出来。
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ericwong
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2011/1/30 9:08:11 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品FITC浓度很小，有多小？
加入FITC的目的是担心样品的浓度会小得检测不到？
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changy5
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2011/10/19 12:51:26 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这么久了不知道解决没有。我们的仪器用10-12M FITC都可以检测出来。标准方法是用丙酮配成FITC 10-3M的储备液，然后用水逐级稀释到10-12M,用碳酸缓冲液pH7.2分离，这是评价检测器性能的一般操作。不过有一点要注意，FITC猝灭很快，一般几个小时就检测不到，哪怕看起来颜色仍然很亮，所以必须用新鲜配制溶液。
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