主题：【线上讲座47期】紫外-可见分光光度法新项目开发解决方案（提问十积分奖励）

原文由 0101(lin010309) 发表:
2 最大吸收波长的确定

当确定了用适当的溶剂去溶解组分后，就要配制一个中等浓度的标准溶液去做全波长扫描，从而确定最大吸收波长。

至于浓度的选择，组分不同，其摩尔吸收系数也不相同，建议先配一个50PPM的溶液，去上机测定，控制其吸光度在0.6左右最好。如果吸光度太大，需要稀释，同理，如果吸光度太小，则需要重新配制。

当然这个不是硬性规定，也要充分考虑到方法本身和样品中组分中含量，我曾经做过硝酸盐和亚硝酸盐的检测，标准曲线最高点吸光度0.2，样品吸光度一般在0.1左右。

2.1具有扫描功能仪器的最大吸收波长的选择

以2μg/ml纳他霉素溶液测定样品溶液,分别对扫描速度和采样间隔分别进行试验,得出最佳采集条件.

2.1.1扫描速度

UVPROBE软件提供了四种扫描速度，分别是低速(very slow)、慢速(slow)、中速(medium)、高速(fast)。本试验采用了上述四种速度进行扫描。仪器条件为：采样间隔0.5,狭缝宽度2.0nm,氘灯转换波长360nm,扫描方式为自动。测定结果见表1:




以上数据表明:在没有特别精确要求下,中速、慢速、低速扫描基本没有区别,但和快速扫描的区别比较大。从扫描时间和氘灯使用寿命等因素考虑，建议采用中速扫描。

原文由 悠旸(ihqs) 发表:
以上是以前收藏的一张能量图，氘灯和钨灯能量在一段区域内有交叉，但根据图上可以看出在大约340nm是一个能量的交叉点，一般在此换灯。

原文由 0101(lin010309) 发表:

原文由 北京哈默尔(zhenduanye) 发表:

原文由 0101(lin010309) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：分光光度法检测过程中显色剂如何优化？

首先是显色剂的选择，这是一个非常复杂的过程，所选择的显色剂既要和测定组分反应，又要有很高的选择性，不能和干扰组分反应。这是一个系统的很专的学科，我认识一个朋友专门做这方面的。
其次，当选择好显色剂后，首先对显色剂的用量进行优化，可以配置一定浓度的显色剂，然后分别添加1毫升，2毫升等进行优化，寻找吸光度的最大为最优化条件。
第三是对酸度进行优化，这方面最好添加缓冲溶液来保持溶液的酸度在一定的范围内稳定。因为一般的显色剂都是弱酸或弱碱，酸度的变化对显色剂的影响很大。
当然，也要考虑交互效应的影响，可以考虑用正交设计进行实验设计。

感谢zhenduanye版主的回答，现在很多时候条件优化或工艺改进会用到响应面设计，想请问就显色剂的选择需要用到这样的方法吗？

原文由 北京哈默尔(zhenduanye) 发表:

原文由 0101(lin010309) 发表:

原文由 北京哈默尔(zhenduanye) 发表:

原文由 0101(lin010309) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教，
请问：分光光度法检测过程中显色剂如何优化？

首先是显色剂的选择，这是一个非常复杂的过程，所选择的显色剂既要和测定组分反应，又要有很高的选择性，不能和干扰组分反应。这是一个系统的很专的学科，我认识一个朋友专门做这方面的。
其次，当选择好显色剂后，首先对显色剂的用量进行优化，可以配置一定浓度的显色剂，然后分别添加1毫升，2毫升等进行优化，寻找吸光度的最大为最优化条件。
第三是对酸度进行优化，这方面最好添加缓冲溶液来保持溶液的酸度在一定的范围内稳定。因为一般的显色剂都是弱酸或弱碱，酸度的变化对显色剂的影响很大。
当然，也要考虑交互效应的影响，可以考虑用正交设计进行实验设计。

感谢zhenduanye版主的回答，现在很多时候条件优化或工艺改进会用到响应面设计，想请问就显色剂的选择需要用到这样的方法吗？

不好意思，响应面设计没用过，请介绍一下，谢谢

原文由 秋月芙蓉(ljhciq) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教:
紫外做亚硝酸盐,效果这样,适宜保健食品吗

原文由 秋月芙蓉(ljhciq) 发表:
zhenduanye您好！我有以下问题想请教:
紫外测磷,检测下限为多少

原文由 小鸟飞翔(tonyding) 发表:

原文由 0101(lin010309) 发表:
2 最大吸收波长的确定

当确定了用适当的溶剂去溶解组分后，就要配制一个中等浓度的标准溶液去做全波长扫描，从而确定最大吸收波长。

至于浓度的选择，组分不同，其摩尔吸收系数也不相同，建议先配一个50PPM的溶液，去上机测定，控制其吸光度在0.6左右最好。如果吸光度太大，需要稀释，同理，如果吸光度太小，则需要重新配制。

当然这个不是硬性规定，也要充分考虑到方法本身和样品中组分中含量，我曾经做过硝酸盐和亚硝酸盐的检测，标准曲线最高点吸光度0.2，样品吸光度一般在0.1左右。

2.1具有扫描功能仪器的最大吸收波长的选择

以2μg/ml纳他霉素溶液测定样品溶液,分别对扫描速度和采样间隔分别进行试验,得出最佳采集条件.

2.1.1扫描速度

UVPROBE软件提供了四种扫描速度，分别是低速(very slow)、慢速(slow)、中速(medium)、高速(fast)。本试验采用了上述四种速度进行扫描。仪器条件为：采样间隔0.5,狭缝宽度2.0nm,氘灯转换波长360nm,扫描方式为自动。测定结果见表1:




以上数据表明:在没有特别精确要求下,中速、慢速、低速扫描基本没有区别,但和快速扫描的区别比较大。从扫描时间和氘灯使用寿命等因素考虑，建议采用中速扫描。

这个图标的1234和表格中的1234是不是反了？图上看的是1，即低速区别比较大