二次供水是生活饮用水二次供水的简称，是指通过二次供水设施间接向用户供给生活饮用水的行为，二次供水设施主要为地下水池与天面水池，按《深圳经济特区生活饮用水二次供水管理》规定，每年至少清洗消毒二次，消毒方式有氯消毒、二氧化氯消毒、臭氧消毒、紫外线消毒等，消毒完成后，由专业清洗机构及时通知市水质检测中心进行取样检测。我水质检测中心在对二次供水8项指标(色度、浑浊度、肉眼可见物、PH、细菌总数、总大肠菌群、余氯)的检测中，在统计其月检不合格率时，其中因细菌总数超标引起二次供水水质不合格的占绝大多数。我们在不排斥原水样的超标外（市政水在经过不合格的二次供水水箱设施时受到一次污染），但也存在二次供水水样的细菌总数在检测中受到二次污染，即在检测中受到各种因素的影响，具体表现在取样、培养基的配备、培养条件、无菌室实验操作、计数及后处理等。因此，要提高二次供水水样细菌总数的准确度，必须对各影响因素进行规范控制。

1 取样中的规范

取样中存在的规范控制主要表现在取样瓶灭菌和水样的采集与保存两方面。

1.1 取样瓶的灭菌

取样瓶必须是清洁无菌的，一般用磨砂口带塞瓶，瓶的颈部和上部必须用锡泊纸覆盖，在160~170℃的烘箱内经干热灭菌2h方能达到灭菌目的。有的技术人员把取样瓶的消毒时间控制为1h，灭菌不彻底。因各种微生物对热的抵抗力不同，芽孢需要160℃、2h才能杀死。

灭菌后的采样瓶，两周内未使用，需重新灭菌。已灭菌和封包好的采样瓶，不论在什么条件下采样时，均要小心开启包装纸和瓶盖，应避免瓶盖和瓶子颈部受杂菌污染。

1.2 水样的采集与保存

采样时,不要用水样冲洗采样瓶，因余氯的存在会影响待测水样在采集时所指示的真正细菌含量，为去除余氯，于灭菌前按500ml采样瓶内加0.3ml10%Na2S2O3溶液，瓶内须留足够空间，一般采样量为瓶容量的80％左右，以便操作时摇匀，以获得具有代表性的样品。

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2011/2/22 16:27:18 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般从取样到检测不要超过2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。而一些采样队为了追求单方面效率，往往从上午8、9点开始取样，到下午5点左右才把水样送到实验室检测，而且没有冷藏设备保准，这一步对细菌总数的准确度控制往往是最致命的因素。

2 培养基配备中的规范

培养基一般都用合成培养基,但在配制、灭菌和保存中须严格控制及规范。

2.1 在配制中，须煮沸，经多层纱布过滤。否则，培养基中的一些细小杂质会影响细菌计数。

2.2 在灭菌中，一般都以121℃灭菌15min。但灭菌完后，培养基须做灭菌是否完全检验，即把培养基置于37℃恒温培养箱中恒温培养24h后，证明它无菌方可使用。

2.3 灭菌后的培养基须标明培养基名称、配制人及配制时间。包上牛皮纸于4~10℃冰箱中保存，避免阳光和杂菌污染及液体蒸发，保存期为一个月。

3 实验室中具体操作的规范

一进入无菌室须进行无菌操作,须穿专用白色工作衣、换专用鞋帽、用消毒酒精揩手和操作台等。在具体操作中，还有下面一些操作需规范。

3.1 水样瓶口，在取1 ml水样先，须经适当火焰灭菌。避免移液管碰到及细菌进入。

3.2 由于细菌受固体培养基表面或深层的限制，按GB5750-85标准细菌培养皿的直径须为9cm，倾注量约15ml，培养基温度须控制在45℃左右，温度太高会把细菌烫死，而温度太低培养基会凝结成块，影响细菌计数。

3.3 倾注培养基时，勿将皿盖打开，以免空气中尘埃及细菌进入。倾注培养基后，须立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。如混匀不均，有时会导致菌落在一区域内密集，很难计数。

3.4 每次检测，须另用一个平皿做平行接种，即同一个样的同一个稀释度须做两个平皿。有的技术人员往住忽略这一点。

3.5 每次检测中，另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照，一般空白细菌数为0，但也有可能为1或2的，（空白平皿细菌数不为0的，说明有污染，按理应重做水样，但同一水样作再现性测定不是件容易的事，重做水样也无意义。）这时计水样的细菌菌落数时须减去空白细菌菌落数。

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2011/2/22 16:27:48 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

4 培养条件的规范

培养后，立即进行平皿菌落计数。培养一般在37℃恒温培养箱中培养，但培养时间须为24±1h，以保准每一个活细胞长出菌落。因细菌生长所需的一定的湿度，可在培养箱中放置一瓶水，以保准细菌长足。

5 计数中的规范

一般计数为同一个水样两个平皿的平均菌落数。如有的平皿的细菌菌落数明显不合理，如有较大状菌落生长时，则弃去不用，直接计另一平皿的细菌菌落数。作平菌落计数时，可用菌落计数器或放大镜检查，以防遗漏,对那些看来相似，距离相近却不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小菌落数的直径，便应一一予以计数。那些紧密接触而外观相异的菌落也应该一一予以计数。

6 后处理的规范

带菌培养基不能直接弃去，一则带菌培养基会污染环境；二则培养皿不干净会影响测定结果。

培养细菌的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，或泡在水中煮沸10min，趁热倒出培养基，用热肥皂水或洗涤剂刷洗残渣，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1~2次，沥干。

7、平衡样的规范

为了监测这一系列步骤是否规范，我们中心规定每10个二次供水水样须做3

个平衡样。即采样时每10个点中有3个点须取同样两瓶水样，并进行盲样编号送检测室进行检测，检测室出结果后再核对平衡样是否平衡。

结语

二次供水水样中细菌总数的测定，受各种因素的影响，但又不象其它化学指标有考核样，因此，只能规范各个检测步骤中的各个细节，才能使水样细菌总数结果的准确度得以控制。

参考文献

1，诸葛健，王正祥编著·《工业微生物实验技术手册》·北京：中国轻工业出版社，1994,6

2，国家环境保护总局/《水和废水监测分析方法》编委会编·《水和废水监测分析方法》-第四版·北京：中国环境科学出出版社，2003,2

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