主题:【求助】Sephadex LH-20凝胶色谱法分离高分子物质

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shangguandg
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请问哪位做过Sephadex LH-20凝胶色谱法分离高分子物质。
本人想利用此凝胶,希望得到帮助,哪位用过请留个联系QQ。
谢谢。
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小不董
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楼主是打算自己做凝胶色谱柱子?
可以参考填充柱的注意事项。
Sephadex LH20是一种价钱较高的填料,特点: 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变。
小不董
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关于Sephadex LH20 的信息,可以找你所购买的供应商那里得到信息,百度上有简单的介绍:
洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇--水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇最为常见,先用50%氯仿--甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。
分离技巧:
(1) 流速不可太快,切切不可新急,所谓欲速则不达。   (2)柱子尽可能长, Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。   (3) 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。   (4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。   (5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质   (6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。   (7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。
shangguandg
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:
关于Sephadex LH20 的信息,可以找你所购买的供应商那里得到信息,百度上有简单的介绍:
洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇--水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇最为常见,先用50%氯仿--甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。
分离技巧:
(1) 流速不可太快,切切不可新急,所谓欲速则不达。   (2)柱子尽可能长, Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。   (3) 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。   (4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。   (5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质   (6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。   (7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。


谢谢您的回帖,我是想外送样品别人做的,。不晓得哪里可以。。
shangguandg
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:
楼主是打算自己做凝胶色谱柱子?
可以参考填充柱的注意事项。
Sephadex LH20是一种价钱较高的填料,特点: 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变。

谢谢您的回帖,我是想外送样品别人做的,。不晓得哪里可以
小不董
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你要分析的是什么物质,什么溶剂?
先联系下当地的高校是否有相应的凝胶色谱。如果有测试条件,别人可能比较容易接受一点。再就是咨询GPC的销售商家,你们城市附近哪里有这设备,是否可以做样。
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