主题：【讨论】液相别冷清，大家来讨论标准曲线的问题，另附爆力美图

最近做液相的标曲，翻出领导以前认证时做的曲线来对照一下.
仪器是AGILENT1100，二元泵，手动进样。
领导的做法：先配制一个500ug/ml的高浓度，再分别稀释成1ug/ml和5ug/ml，然后以1ug/ml的标样进样2ul、5ul、10ul和20ul，再以5ug/ml的标样进样10ul，那么就以2ng、5ng、10ng、20ng和50ng所对应的响应做成标准曲线。
我的做法：配制0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、0.5ug/ml和1.0ug/ml的标液进样，以前面5个浓度对响应做曲线。
结果对比：15种物质的混标，取其中一种物质的曲线来说，领导的：Y=39.96X+6.47，R2=0.992，其他十四种也基本如此。我的：y = 708.66x + 8.81
R2=0.9998,其他十四种R=1.
我觉得领导的做法有问题，但他说是一样的，没问题，大家觉得呢？如果你是评审老师你会让它通过吗？


发图片像灌水，还是删除其他的吧，留下的这张图比较有质感，大家可以接受吧，

言归正传，为什么第一种做法与第二种的曲线存在较大差异，我总结了几点，大家看看，有问题望大家指正

第一：手动进样，重现性不好，尤其在进2ul,5ul时。公司有几个同事做液相，大家打针的方式有所不同，分三种：1,将针插入六通阀，推一下，半秒钟后，再推一下，再半秒后再推一下，直至推完。2,将针插入六通阀后，轻轻一推，收工。3,将针插入六通阀后，猛的一推。同一样品，三人依次进同样体积，得到的响应还是有点差异的。第3种推法，响应最高，但我想，无论你用哪种推法，保证重现性才是最终目的。所以我选第2种，轻轻一推，匀速推进，尽量使每次力道相同。
第二：进不同体积引起更大误差，这个观点大家都认同。
第三：以绝对质量对响应做曲线，很多资料都不提倡计算绝对质量，这会引起更大误差，也许跟这里的曲线不好无关，但跟定量误差会有很大关系。
第四：对液相进样装置六通阀的误解，尤其是做过气相的人。他们会认为我打多少体积的液体进去，就是多少，不同的体积与响应会成线性，理论上气相是这样，但到液相这里就不是这样了。论坛上有几个帖子｜HPLC六通阀进样器的使用及保养，相信大家都看过，进样20ul，实际只打进了75%也就15ul的液体，进其它体积是不是也只有75%就难说了，不过各厂家的阀不同，但也基本如此。如你想真正进20ul，就不得不大体积进样，这跟液体的物理知识有关。所以说不同体积是难成线性的。
所以说如果我是评审老师，那么我肯定要开不符合项或者是严重缺陷。