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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【讨论】一个板油的问题。关于参比，大家讨论下

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初学者&九点虎

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发表于：2011/03/26 22:45:15 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最近做了个实验《菲林试剂比色法测马铃薯淀粉中的总含糖量》用的是可见光分光光度计想请教借个问题多谢O(∩_∩)O哈：
1）“扣去参比溶液的吸光度”是不是和“将参比溶液的吸光度设为零再测各溶液的吸光度”的效果是一样的？
2）那个双光束仪器是什么样的呀？为什么单色光通过两个池就能够抵消掉反射光的部分？>>>>不知道我实验室用的是单光束还是双光束。。
3）测量前需要冷却，温度是不是对吸光度的测量有影响啊？还是会损坏仪器？
4）我们做的这个菲林试剂比色法限制了一个还原糖的测定范围，是不是因为浓度过高或过低分光光度计的测量会有误？吸光度和含量没有很好的线性关系？
5）我们实验书上的表述让我怎么觉得：参比溶液是为了排除颜色反应之外的因素，而空白管装的是除了被测液其它所有的试剂？

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2011/3/27 6:32:21 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

“扣去参比溶液的吸光度”是不是和“将参比溶液的吸光度设为零再测各溶液的吸光度”的效果是一样的？这个是一样的。吸光度与温度有关系的

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夕阳

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2011/3/27 9:14:05 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 初学者&九点虎(zhouyuhu) 发表:
最近做了个实验《菲林试剂比色法测马铃薯淀粉中的总含糖量》用的是可见光分光光度计想请教借个问题多谢O(∩_∩)O哈：
1）“扣去参比溶液的吸光度”是不是和“将参比溶液的吸光度设为零再测各溶液的吸光度”的效果是一样的？
2）那个双光束仪器是什么样的呀？为什么单色光通过两个池就能够抵消掉反射光的部分？>>>>不知道我实验室用的是单光束还是双光束。。
3）测量前需要冷却，温度是不是对吸光度的测量有影响啊？还是会损坏仪器？
4）我们做的这个菲林试剂比色法限制了一个还原糖的测定范围，是不是因为浓度过高或过低分光光度计的测量会有误？吸光度和含量没有很好的线性关系？
5）我们实验书上的表述让我怎么觉得：参比溶液是为了排除颜色反应之外的因素，而空白管装的是除了被测液其它所有的试剂？

我的回答如下：
（1）应该说两种做法是一个效果。
（2）关于这个问题，资料书籍和论坛里谈论的太多了，请提问者自己花费些精力找找看，这样会印象深刻些。
（3）测量前需要冷却什么？室温？还是样品？提问者连这样一个简单问题都交待不清让人如何回答？
（4）这个问题，资料和论坛中也常常谈起，这里不赘述了。
（5）没看懂提问者的观点，无法回答。

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2011/3/27 10:33:36 Last edit by anping

tutm

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2011/3/27 11:47:34 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1. 对仪器而言，只要你使用的方法中，溶液浓度的吸光度是按理想线性变化的，那就是一样的。

2. 找本相关的仪器书看看；你所用的是“可见光”分光光度计，那应该就是单光束的了，因为双光束都是比较高级的仪器，不会只有可见光，应该还能做紫外。

3. 如果指的是样品溶液，温度对测得的吸光度值应该有影响，至少会不稳定。

4. 应该是太高了不能保证良好的线性关系；太低了仪器测得的读数误差太大。

5. 是不是和第一个问题类似？如果参比溶液是所说的空白液，那读取到的吸光度自然是排除了目标测试物显色反应之外的因素。如果参比液是蒸馏水，那只是给仪器一个起始的基准点，测得的吸光度值并没有排除你方法中的任何“颜色”因素。

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