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毛细管电泳（CE）

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主题：【求助】激光诱导荧光分离DNA

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sunpengwjh

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发表于：2011/04/19 08:27:46 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

用激光诱导荧光检测器做DNA分离检测，以HPMC为筛分介质，TBE为缓冲液，SYBR Green为荧光染料。在电泳前，荧光染料应该加在哪里？是DNA样品里混合吗？筛分介质里？还是TBE缓冲液里？

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2011/4/27 9:59:51 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你的DNA分析仪是哪个？我当时做的时候是我们实验室自行研制的DNA分析仪，花了四年的时间才完成。我之前做的DNA分离是将染料、DNA样品、筛分介质以及缓冲液逐次加入样品池

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ericwong

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2011/4/29 9:30:14 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主是用毛细管电泳做的，没有用DNA分析仪。

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ericwong

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2011/4/29 9:34:39 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

荧光染料不是事先标记好吗？

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viernes

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2011/8/26 21:04:20 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
用激光诱导荧光检测器做DNA分离检测，以HPMC为筛分介质，TBE为缓冲液，SYBR Green为荧光染料。在电泳前，荧光染料应该加在哪里？是DNA样品里混合吗？筛分介质里？还是TBE缓冲液里？

SYBR Green 是核酸染料会选择性的与核酸发生吸附结合结合后荧光增强几百倍不会造成很明显的基线升高
因此可以直接把染料加在BGE里面一般推荐1*浓度染料分子与核酸差速甚至反相迁移的过程中会按照核酸长度等比例结合并使target analyte被检测到
如果把染料加在样品里面对于有些样品也是可以做出来的但是当target analyte是比较小的核酸片段时有可能发生已结合的染料在电泳过程中丢失导致样品信号降低甚至测不到的现象

所以一般推荐染料加在BGE里面
尤其对于单链核酸的分析，更要遵循这一原则，因为单链核酸与SYBR Green（无论是I还是II型）都是比较弱的（与双链相比）

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2011/8/26 21:06:32 Last edit by viernes