主题：【分享】分子生物学常用试剂的配制

4．常用缓冲液： (1)、TE 、pH 7.4 10mmol/LTris·Cl (pH7.4) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 、pH 7.6 10mmol/LTris·Cl (pH7.6) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 、pH 8.0 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) （2）、STE(亦称 TEN) 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) STE液（另一种配方）     Tris-HCI 10mM PH8.0     NaCl 10mM     EDTA 10mM PH8.0 （3）、STET 0.1mmol/L NaCl 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 5%Triton X-100 TNT 10mmol/LTris·Cl (pH8.0) 150mmol/L NaCl 0.05% Tween 20 （5）、电泳缓冲液 Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱 57.1ml 冰乙酸 100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释50倍。 Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱 15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml） 40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍。 Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：54g Tris 碱 27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用时再稀释10倍

（6）、碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

（7）、Tris-甘氨酸：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱
94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3）
50ml 10%SDS（电泳级）
2×SDS 凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris·HCl(pH6.8)
200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2％溴酚蓝
20％甘油

（8）、30％丙烯酰胺：
将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。

（9）、10mol/L 乙酸铵：
把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

（10）、1mol/LCaCl2：
在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。

（11）、2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。
（12）、1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。

（13）、0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。

（14）、溴化乙锭（10mg/ml）：
在100ml水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

（6）、碱性缓冲液：1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

（7）、Tris-甘氨酸：5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱
94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3）
50ml 10%SDS（电泳级）
2×SDS 凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris·HCl(pH6.8)
200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2％溴酚蓝
20％甘油

（8）、30％丙烯酰胺：
将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加
水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室温。

（9）、10mol/L 乙酸铵：
把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

（10）、1mol/LCaCl2：
在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。

（11）、2.5mol/LCaCl2：
在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。
（12）、1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：
用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。

（13）、0.5mol/LEDTA(pH8.0)：
在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。

（14）、溴化乙锭（10mg/ml）：
在100ml水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

（15）、1mol/LMgCl2：
在800ml水中溶解203.3gMgCl2·6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。

（16）、酚：氯仿：
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris·Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris·Cl(pH7.6)液层，保存于4℃。

（17）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）：
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 升，高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。

（18）、乙酸钾溶液（用于碱裂解）：
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

（19）、3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 7.0)：
在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。

（20）、1mol/LTris：
在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。
pH        HCl
7.4        70ml
7.6        60ml
8.0          42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。

（21）、Tris 缓冲盐溶液（TBS）：
在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。

（22）、5mmol/LNH4Ac 溶液：
秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。

（23）、10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。

（24）、10%十二烷基硫酸钠（SDS）：
在900ml水中溶解100g 电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。

四）培养液 ,培养基

1、人造海水

配方一 

氯化钠( )                      24.72克

氯化钾（ ）                      0.67克

氯化钙（ ）              1.36克

氯化镁（ ）              4.66克

硫酸镁（ ）              6.29克

碳酸氢钠（ ）                  0.18克

蒸馏水                                加到1升

把上述各种盐溶解在少量蒸馏水中，再加入碳酸氢钠，最后用蒸馏水稀释到1000毫升。

配方二 

氯化钠    45.0克                    硫酸镁    0.1克

氯化镁    5.0克                    氯化铁（1%溶液）    1滴

先把硫酸镁、磷酸一氢钾、氯化铁用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙溶解在20毫升蒸馏水里，把此溶液逐滴加到上述溶液内，装瓶保存。

配方二    克诺普氏（Knop’s）溶液

硝酸钾    1克                      硫酸镁    1克

磷酸二氢钾    1克                  硝酸钙    3克

先把硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾用少量蒸馏水溶解，加蒸馏水到980毫升。随后取硝酸钙，用20毫升蒸馏水溶解，加入到上述溶液内。溶液灰形成白色沉淀，在使用是必须摇动。

在以上溶液中加入蔗糖溶液（1～4%），能刺激某些藻类形成游动孢子。该液用于培养绿藻。

3、植物无土培养液

配方    霍格伦德（Hoagland）和斯纳德（Snyder）液

硝酸钙    0.821克                硝酸钾    0.506克

磷酸二氢钾 0.136克                硫酸镁    0.120克

酒石酸铁  0.005克

把上述盐类溶解在少量蒸馏水里，然后稀释到1000毫升。

（五）培养基

1、细菌培养基

配方一    牛肉膏琼脂培养基

牛肉膏    0.3克                    蛋白胨    1.0克

氯化钠    0.5克                    琼脂      1.5克

水        1000毫升

在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二    马铃薯培养基

取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。

配方四    根瘤菌培养基

葡萄糖    10克                    磷酸氢二钾              0.5克

碳酸钙    3克                    硫酸镁（ ）  0.2克

酵母粉  0.4克                    琼脂                      20克

水    1000毫升                    1%结晶紫溶液              1毫升

先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。

2、放线菌培养基

配方一    淀粉琼脂培养基（高氏培养基）

可溶性淀粉    2克                硝酸钾      0.1克

磷酸氢二钾    0.05克              氯化钠      0.05克

硫酸镁        0.05克              硫酸亚铁    0.001克

琼脂          2克                水        1000毫升

先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。

配方二    面粉琼脂培养基

面粉    60克                      琼脂    20克

水      1000毫升

把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。

3、真菌培养基

配方一    萨市（Sabouraud’s）培养基

蛋白胨    10克                  琼脂    20克

麦芽糖    40克                  水    1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二    马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三    黄豆芽汁培养基

黄豆芽    100克                    琼脂    15克

葡萄糖      20克                    水  1000毫升

洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。

配方四    豌豆琼脂培养基

豌豆    80粒                      琼脂    5克

水    200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。

4、食用菌菌种培养基

配方一    马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

20%马铃薯煮汁    1000毫升

蔗糖    20克                      琼脂      18克

把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。

米培养基
成份：白米        20克              水      1000毫升
      琼脂        20克              吐温80  10毫升
制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。
      2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。
      3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。
质控标准：1灭菌。
          2要求清亮。
          3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。
用途：培养白色念珠菌用。

蛋白胨水培养基
成份：蛋白胨    1克          氯化钠      0．5克
      水加至    100毫升        PH调至      7．8
制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。
质控标准：1  放置37℃无菌生长。
          2  接种大肠杆菌24小时生长良好。
          3  可作中国兰平板基础液。
          可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

血培养基
成份：蛋白胨    10克          牛肉膏      5克
      氯化钠    5克            葡萄糖      3克
      枸椽酸钠  3克            MgSO4。7H2O  20毫升
      0．5%PABA  10毫升      酵母浸液  10毫升  0．2克（2%过滤）
      *酚红0．4%  6毫升        水      1000毫升
      琼脂      0．5克     
*：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。
制法：1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4
      2。调好PH后再加酚红。
      3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）   

罗文斯坦培养基
成份：磷酸二氢钾      2．4克              硫酸镁  0．24克
      枸椽酸钠        0．6克              天门冬素  3．6克
      纯甘油（丙三醇） 12毫升              水      600毫升
      马铃薯粉        30克              鸡蛋    1000毫升（约3公斤）
      2%孔雀绿水溶液  20毫升     
制法：1  除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。
      2  鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。
      3  将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。
      4  间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。
质控标准： 1  灭菌试验合格。
          2  接种结核杆菌要求两星期生长良好。
用途：作结核分枝杆菌培养用。

结核半固体培养基
成份：磷酸氢二钠      19克              硫酸镁      0．6克
      磷酸二氢钾      2．5克              天门冬素    5克
      1%孔雀绿      1．5克              甘油        20毫升
      吐温80（10%）  5毫升            水          1000毫升
      枸椽酸钠        2．5克              动物血清    100毫升
      琼脂            1．5克（80小时用甲醇去脂）
      1%孔雀绿      0．78毫升          吐温80（10%） 5毫升
      加动物血清      100毫升
制法： 1  除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2
      2  分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。
      3  待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。

相当好的资料，多谢分享了