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主题：【求助】HPLC 流动相检测相关问题，请教大家！！！

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liuhaaitao3592
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发表于：2011/05/27 10:33:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于流动相配制问题

各位大侠好。
本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA，流动相是：25mM柠檬酸，125mM磷酸钠（文献中写的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸调节pH至2.5（我们实际操作中，比2.5高）.

现有问题如下：

1.关于pH:我第一次检测的时候，调节pH至3.5，但是出峰时间随着时间的进行也向后推移了，而且是每进一针都向后退0.1-0.2分钟，推测可能是由于pH变化导致的，于是3天后又测那瓶流动相的pH为3.8，又过了三天再测变为4.2.可是我第二次测时候，当天做完实验测得pH值和我第二天早上测得pH值几乎没有变化！于是我又迷茫了！莫名奇妙。于是又找其他原因。

2.我用sodium phosphate，瓶子上写的是这个，但是化学式是磷酸二氢钠。但是就缓冲对来说，是不是没有太大影响？另外在配置流动相的时候有没有什么注意事项？比如操作有没有什么规定？（我是先放柠檬酸，再放磷酸二氢钠，然后让EDTA，最后放SOS，倒入蒸馏水定容至1升，然后调节pH,不知道是不是操作有问题？）多谢！！
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2011/5/27 11:06:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相配制好后不应该稳定性这么差的，测定过一天之内的流动相PH变化情况吗？
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jhylc1976
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2011/5/27 13:01:38 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得：关键的问题不在于流动相的PH值，缓冲溶液的PH值是比较稳定的。可能的关键的因素是，色谱柱平衡的问题，是否色谱柱还没有完全平衡就开始进样了，造成保留时间差异很大。
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boboenid007
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2011/5/29 14:03:25 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
几点建议您是否愿意参考？
1.每次使用pH计前，您是否用标准缓冲溶液有过校验？
    还有调ph时需要进行温度测试的（我们用的是便携式，每次检验前需要输入溶液温度，这个温度的要求是标准缓冲溶液与待测液是同一个温度条件下的）所以您能否保证每次检测ph值时溶液的温度都相同吗？
2.测定ph时，您是否加转子搅拌或玻璃棒进行充分搅拌后才测试的ph呢？
3.标准pH：2.5，可是您调的pH：3.5，检验标准pH调节误差范围应该是±0.1吧，首先这点，我有点疑惑，如果不影响您的图谱优化，或许可以忽略~~呵呵
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liuhaaitao3592
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2011/5/30 14:47:45 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
流动相配制好后不应该稳定性这么差的，测定过一天之内的流动相PH变化情况吗？


一天之内几乎没有变化
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liuhaaitao3592
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2011/5/30 14:48:36 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 jhylc1976(jhylc1976) 发表:
我觉得：关键的问题不在于流动相的PH值，缓冲溶液的PH值是比较稳定的。可能的关键的因素是，色谱柱平衡的问题，是否色谱柱还没有完全平衡就开始进样了，造成保留时间差异很大。


您指的是压力吗？我一直在旁边看着，上下浮动不超过20（进样前用流动相先跑了至少2小时），我觉得还是我操作有问题，但是就是不知道哪出了问题
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xhwy2010
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2011/5/30 16:55:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
"上下浮动不超过20"压力单位如果是psi,还算正常，如果是bar,那压力变化就太大了。
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yukepotato
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2011/6/25 12:58:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuhaaitao3592(liuhaaitao3592) 发表:
关于流动相配制问题

各位大侠好。
本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA，流动相是：25mM柠檬酸，125mM磷酸钠（文献中写的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸调节pH至2.5（我们实际操作中，比2.5高）.

现有问题如下：

1.关于pH:我第一次检测的时候，调节pH至3.5，但是出峰时间随着时间的进行也向后推移了，而且是每进一针都向后退0.1-0.2分钟，推测可能是由于pH变化导致的，于是3天后又测那瓶流动相的pH为3.8，又过了三天再测变为4.2.可是我第二次测时候，当天做完实验测得pH值和我第二天早上测得pH值几乎没有变化！于是我又迷茫了！莫名奇妙。于是又找其他原因。

2.我用sodium phosphate，瓶子上写的是这个，但是化学式是磷酸二氢钠。但是就缓冲对来说，是不是没有太大影响？另外在配置流动相的时候有没有什么注意事项？比如操作有没有什么规定？（我是先放柠檬酸，再放磷酸二氢钠，然后让EDTA，最后放SOS，倒入蒸馏水定容至1升，然后调节pH,不知道是不是操作有问题？）多谢！！


磷酸二氢钠是sodium Dihydrogen phosphate
再说缓冲盐怎么可能在短短两天内pH变化这么多啊？
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