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主题：【分享】倒平板的小技巧

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发表于：2011/06/07 08:11:44 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一、如何防止倒皿时的冷凝：
1、有经验的都知道，手心不烫手背烫，这是一个经验数据，此时的温度在45度左右，最适合倒皿。
2、如果要连续倒多个皿，尤其是在冬天往往容易凝固，一旦凝固则需要再加热到较高温度才能溶化（玻璃体的特性）。所以建议此时有个50度的恒温水浴开着，随时把装培养基的三角瓶放进去效果会好不少。
二、培养皿中有冷凝水：
一般来说，都会有几滴，影响不大。如果过多则需要注意。大概的情况是：
1、倒皿前将平皿最好保持在35-40度的温度（触手有温热感），
2、保持平皿静置环境温度高一些。

如何倒已冷却的琼脂培养基？
以往对已冷却的培养基再融化颇感头痛心烦，因为放在电炉上烤不仅需要耐心，还得加上小心，一不留神就会冲湿瓶塞；重新放入灭菌锅加热吧，好是好，可又嫌费事。
现在好了，我们用微波炉加热，又快又好，融得彻底，用着放心。当然，装培养基所用的三角瓶得能够放入微波炉才行：250ml.

倾注平皿要左三圈，右三圈的晃动，注意不要把平皿盖沾上，并且要轻轻晃动

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2011/6/7 8:12:15 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

在电炉上直接加热融化营养琼脂时应注意在融化到上面剩最后薄薄的一层时应用小火，缓慢加热，防止气体冲破薄层时导致爆沸，营养琼脂冲出三角瓶。

最怕的就是加热了，一分心就“开啤酒瓶”，像TCBS这样的变态培养基，最喜欢“开香槟”，一沸腾不到一秒就会冲上来，如果不专心看着，马上就会冲开瓶塞（塞的不太紧的话），变成胜利的香槟，最高能喷一米高，杀伤半径一米。

我一般是六十度的时候倒，前后左右晃两下，然后左三圈右三圈...
温度到底怎么控制？我有时候六十度刚倒到里面就结块了，是不是先应该把1mL的溶液吸到平板里面晃均匀了？

以前用国产琼脂凝固温度比较高，50-60度就开始凝了

不同品牌的琼脂质量不一样，同样按照国标中的配方琼脂含量1.5%，有些琼脂凝固很快，有些凝固慢一些，还有环境温度偏低，琼脂凝固也会快一些，我们是根据实际情况，适当调整琼脂的含量，在室温较低时我们所配的培养基琼脂用量就偏少一些，还有在倒平板和混匀时动作要快一些，室温实在太低，也可以把培养皿放到烘箱中适当加热一下（40度左右）。

最好在横向晃动三次，使细菌分散的更加均匀，防止平皿边缘菌落过多。

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2011/6/7 8:17:56 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1.培养基配方的选定

同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。

2 ．培养基的制备记录

每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。

3.培养基成分的称取

培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。

4.培养基各成份的混合和溶化

培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。

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2011/6/7 8:18:37 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

5.培养塞pH 的初步调整

培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。pH调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。

6．培养基的过滤澄清

液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。

琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55-60℃ 的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/ 2，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白．强力振摇3-5 分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。

若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。

7.培养基的分装

培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/ 3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3 底层和1/ 3斜面的量为恰当。分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。

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2011/6/7 8:19:50 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

8.培养基的灭菌

一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。

某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。

琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。

9. 培养基的质量测试

每批培养基制备好以后．应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。

将全部培养基放入36±1℃ 恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。

用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24- 48 小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。

10.培养基的保存

培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。

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