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主题：【求助】HPLC 测试样品遇到问题了。怎么解决才好？

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jianfkunzhong
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发表于：2011/07/07 14:32:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
内标法测量前，先混合后过滤，还是先过滤后混合？
大家好。

采用内标法测量物质A，内标物为B。

已单独配置好500 ug/mL的A和B，想稀释成10  ug/mL 的A和B，然后混合，用HPLC测出峰面积后，根据进样质量和峰面积的关系求出F. A和B的溶解性均大于500 ug/mL。

请问 哪种测试方法正确
1)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL,  再各取A和B 1mL混合，过滤，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）
2)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL，过滤，再各取A和B的滤液 1mL混合，进行测试 （这时A和B的进样质量比为1：1）
3) 将500 ug/mL 的A和B 分别过滤，各取1mL混合，将滤液再稀释到10  ug/mL，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）

在测量未知样品时，假设未知样为含有A的水溶液，再采取以上一种方法进行求解F的测试后，内标物应该怎样加到待测样品中呢？是取相同体积的未知样和内标物 (10  ug/mL) 混合后进行过滤，还是先将未知样过滤后，再混合同体积的内标物(10  ug/mL)和样品进行测试呢？

多谢了~~
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2011/7/7 18:05:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
　　我们是这样做的：

　　为了看单个的对照品的峰位置，先配各自的对照品溶液。比如：A液和B液。

　　既然要把一个物质作内标，那么就得完全保证在操作过程中，内标与你所测的物质完全是在同一条件下进行。

　　所以，你的做法是不对的。即不是先混合二者的液体再过滤，也不是先单独把二者的溶液过滤再混合。

　　而是：称取A和B后置于同一容量瓶，配制混合对照品，再过滤，进样。
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2011/7/7 18:08:54 Last edit by zhetengwang
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2011/7/8 11:29:06 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
称取A和B后置于同一容量瓶，配制混合对照品，再过滤，进样。

这个很多人都称不好啊
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