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主题：【求助】果蔬农残检测，空白对照试验的吸光度的重复性问题

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insect2006
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发表于：2011/07/13 11:27:20 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测，遵循的国标是GB/T5009-2003，采用酶抑制率法
里面的检测步骤里有空白对照这一步骤
我在农残专用仪器里面做了数组空白对照测试，发现在相同温湿度、同一批试剂的情况下，其吸光度的重复性很差(但是都在国标要求的0.4以上)，最大误差可达50%，请问在这样的情况下，测试蔬菜样本溶液后得出的抑制率结果是否具有说服性？？
该帖子作者被版主 mengzhaocheng加 1积分， 2经验，加分理由：谢谢在本版块发有价值的帖子
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2011/7/13 11:32:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
测试所使用的试剂都是符合国标要求的，乙酰胆碱酯酶和显色剂和底物、缓冲液的配置比例为1:1:1:25
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2011/7/13 12:44:48 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
另外我对酶抑制率法的计算不是很理解
(1-At/A0)*100%
其中A0是空白对照的吸光度
At是样本溶液的吸光度

这里为什么是A0/At呢？？空白对照的作用，我的理解是去除除检测物以外的所有干扰，那么这里应该是At-A0吧？？为什么是除的呢，实在想不通，求解
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mengzhaocheng
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2011/7/13 12:52:31 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
帮楼主顶一下帖子，希望知道的版友帮下忙
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tutm
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2011/7/13 13:43:16 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看楼主的做法也许是按购买的仪器使用说明步骤进行的，给你一份GB/T5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
标准的原文，请对照一下你的方法是不是按国标一样
附件：
GBT 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 .pdf
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2011/7/13 14:28:29 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢LS，我就是按照国标的检测流程来做的
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2011/7/13 14:31:04 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我对这个空白对照测试实在不能理解
国标里面说空白对照的吸光度结果要大于0.3以上，这个是为了确保酶的活性？
既然这样，为何要在抑制率公式里面引入这个结果？？

另外底物的作用是什么？？
乙酰胆碱酯酶与底物水解反应的生成物的含量在反应前后的吸光度变化值这个指标到底起什么作用？标定作用？？

酶抑制率公式是怎么求出来的？？
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2011/7/13 14:44:16 Last edit by insect2006
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2011/7/14 9:23:41 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
再顶上去，求高人指点！！
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2011/7/18 15:45:32 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
顶，真的没人帮帮么？
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tutm
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2011/7/19 11:45:13 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这位版友真诚求知值得赞赏。本人也没做过这个，只是“现学现卖”解释一下，如有不妥，请其他版友补充修正。

底物是指生化反应中，为计量某个反应程度而加入的特定物质，它会与生化活性物质发生具有既定特征的化学反应，其基本作用是可以对特征反应过程定量。（这是根据自己理解写的，可能有点拗口，但自我感觉比百度来的更确切）

酶抑制率，是指加入你的样品后，在指定时间内，原来酶转化（分解）底物活力或程度被降低的百分率

(1-At/A0)*100%，
式中：
A0，是不加被测样品时原来酶分解底物后的吸光度，代表了原来酶分解底物活力或程度。
At，是加了被测样品，酶分解底物后的吸光度，代表已被样品部分抑制后的酶分解底物活力。
则，At/A0，就是加了样品后，酶还剩下的活力；那么(1-At/A0)就是“酶被样品抑制的分数”了，乘上100%就是酶抑制率。
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2011/7/20 9:57:07 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢LS的回答，已经搞明白了
现在的问题是空白对照的吸光度重复性太差
根据酶抑制率公式，计算的结果重复性也会很差
我的检测信号是没有问题的
看来是反应剧烈程度不一样
这个问题不知道如何解决
因为我是在同样的温湿度环境下，同一批次试剂，同样的放置时间+同样的反应比例
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