主题:【第六届原创】多肽检测方法的建立

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xiaoxiongyuniu
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xizhi
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chloeqian
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请教楼主一个问题:我最近也在分析一个多肽的物质,但是具体结构不适很清楚,只知道分子量大概为2000左右。用磷酸和磷酸二氢钠和乙腈作流动相。分离时调节了很多参数,可是都没有办法将主峰和前面的杂质很好的分离开来。请问,分析多肽时,分离度主要和什么有关系?谢谢了
xizhi
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分离度主要受制于流动相里盐的选择和柱子的好坏,一般尽量不要用无机盐,根据不同情况可以选择三氟乙酸、磷酸三乙胺、醋酸铵等
yuning4584
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yishengweiyao
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谢谢楼主,分享。我现在在做一些多肽的分离。楼主对特别疏水的多肽纯化有什么建议啊。疏水AA 占到序列的70左右。十几个AA的长度。都不出峰,但
质谱是有要的东西的,而且还很好。
xizhi
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对于这种比较疏水的不出峰,主要是溶解以及柱子选择,还要看这条肽的酸碱性,如果不是酸性的,可以考虑先用纯甲酸直接溶解,再用乙腈与水稍微稀释,流动相还用0.1%TFA先试试;酸性的就要考虑用氨水溶解,但PH尽量不要超过8,否则就直接用反相聚合柱,流动相用4g/L醋酸铵,根据需要PH可以往上调。如果这时候C18柱还测不出来,就改用C8或CN柱或反相聚合柱(依次)。注意进样口尽量要用溶解液过一下。如果还不能解决,请留言或者回复到站内邮箱
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2011/12/17 14:12:10 Last edit by xizhi
wei_sir
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谢谢楼主分享,我刚开始做多肽LCMS,液相是WATERS,质谱是LCQ,希望可以多向你请教学习
yishengweiyao
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你好,对于20个AA左右的肽,疏水达到70%。乙腈和水做流动相分析没有峰,ms是正确的。有什么好点的解决方法么
有水有渝
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检测波长是多少,建议试试0.1%TFA-乙腈为流动相试试。
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