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主题：【讨论】在一个资料上看到了新柱老化平衡的相关操作，请教一下各位具体操作需要这么麻烦么？

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immortality630
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发表于：2011/08/03 12:48:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
普通C8及C18反相色谱柱（C8&C18 Reversed-phase chromatography column）
（1）准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。（新柱老化前，此步决不可忽略）
（2）将色谱柱反向连接，不接检测器。用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）
（3）再将色谱柱正向连接，不接检测器。用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）
（4）连接检测器，开启柱温达30℃～40℃，用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗4h以上。（目的是充饱和色谱柱，去除柱内空气）
（5）用水-有机相（10：90～5:95），以0.3～0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相（95:5→0:100）梯度变化，以0.3～0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂，以0.3～0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。（目的是老化色谱柱）
（6）在平衡前根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
（7）然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤，超声脱气后的流动 相，按检测方法平衡至少1h，待基线稳定后，开始进样检测。
（8）由于是新柱首次使用，在进样完成后需立即对色谱柱进行净化和有机溶剂饱和。方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上→再用水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗30min以上（或者采用溶剂梯度变化至100%有机相冲洗120min以上）→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。若流动相中有缓冲盐，建议用100%水冲洗1h以上后，再重复上述净化程序（但个别品牌C8或C18色谱柱不耐受纯水冲洗者例外）。       在新色谱柱使用几次，均正常后，运行完毕净化处理程序可简化为：用水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上→选择柱说明书中保存条件（Storage Conditions）规定的保存溶剂（Storage Solvent）冲洗10倍柱体积以上→封口，保存。
（9）净化完毕，若次日不再使用，可取下色谱柱，用封头螺丝密封，交色谱柱管理人员入库保存于防尘环境下，备案。
（10）备注：老化用有机溶剂推荐使用色谱级甲醇，不同品牌色谱柱需区别对待；水需用去离子的超纯水。若色谱柱使用后入库保存，长时间未使用，重新使用时仍需重新饱和。方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上→然后调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右→最后用流动相平衡1h以上，进样检测。必需注意流动相pH值不能超过色谱柱pH耐受范围，过酸容易使键合相变态，过碱则易导致硅胶溶解柱床塌陷。
（11）特别提示：当供试品溶液中含有一定量表面活性剂，多次进样后，由于表面活性剂会在筛板及硅胶表面形成表面膜，导致峰变宽、拖尾甚至分叉。此时，处理方法如下：将色谱柱反向连接接，不接检测器，用水-乙腈（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗2h以上→再用100%乙腈，以0.6ml/min流速冲洗1h以上→然后正向连接好色谱柱，用水-乙腈（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%乙腈，以1ml/min流速冲洗1h以上，即可恢复。
具体操作真的要这么麻烦么？我要做95%的水相（盐溶液），新买了一个迪马的RP-18柱子，出厂的流动相是乙腈+水，我打算把预柱换个新的柱芯，然后连接上色谱柱进行老化，接下来需要如上这样操作么？
另，新柱老化要不要安装预柱，流动相为高水相在平衡跑样过程中还有没有其他的注意事项？谢谢！
该帖子作者被版主 zhaohua8011加 3积分， 2经验，加分理由：鼓励
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2011/8/3 12:58:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新柱子不需要这么麻烦的，像你做样的条件可以直接使用，用完及时冲洗即可！
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johnsonxiao
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2011/8/3 13:34:13 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新柱子采用流动相多冲冲就差不多了，不需要这么麻烦吧
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roland2008
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2011/8/3 13:54:34 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个过程真的有点麻烦
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akang789
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2011/8/4 20:16:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们买来的柱子应该是厂家都已经老化过了吧，应该不用这么麻烦的冲洗的。
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2011/8/4 20:16:21 Last edit by akang789
蓝人
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2011/12/13 15:03:10 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
特别提示：当供试品溶液中含有一定量表面活性剂，多次进样后，由于表面活性剂会在筛板及硅胶表面形成表面膜，导致峰变宽、拖尾甚至分叉。此时，处理方法如下：将色谱柱反向连接接，不接检测器，用水-乙腈（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗2h以上→再用100%乙腈，以0.6ml/min流速冲洗1h以上→然后正向连接好色谱柱，用水-乙腈（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%乙腈，以1ml/min流速冲洗1h以上，即可恢复。
这个不是很理解?
用乙腈水溶液可以除去表面膜？用其他的溶液甲醇行否？？
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xiaowang268
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2011/12/13 18:44:09 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新柱子没必要这样的
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tangtang
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2011/12/13 18:52:31 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新柱子主要看保存溶液是什么，会不会与要用的流动相不混溶或导致盐析出。如果有必要，用合适的过渡溶液冲洗30分钟左右。
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xiaowang268
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2011/12/15 9:14:05 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般用甲醇或乙腈冲上一段时间就可以了
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Ins_1bd2abd3
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2024/3/7 21:16:51 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 蓝人(yuxiaofeng86) 发表:
特别提示：当供试品溶液中含有一定量表面活性剂，多次进样后，由于表面活性剂会在筛板及硅胶表面形成表面膜，导致峰变宽、拖尾甚至分叉。此时，处理方法如下：将色谱柱反向连接接，不接检测器，用水-乙腈（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗2h以上→再用100%乙腈，以0.6ml/min流速冲洗1h以上→然后正向连接好色谱柱，用水-乙腈（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%乙腈，以1ml/min流速冲洗1h以上，即可恢复。
这个不是很理解?
用乙腈水溶液可以除去表面膜？用其他的溶液甲醇行否？？
同问，我想问一下可以用甲醇替代吗
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dadgoh
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2024/3/8 6:49:21 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_1bd2abd3(Ins_1bd2abd3) 发表: 同问，我想问一下可以用甲醇替代吗
新柱可以带有预柱活化，改用甲醇也可以。
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手机版： 在一个资料上看到了新柱老化平衡的相关操作，请教一下各位具体操作需要这么麻烦么？
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