主题:【求助】分子量相差不多的两个蛋白如何用液相检测

浏览0 回复8 电梯直达
cy_win
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现在在做液相分析方法的优化。。。两个小分子蛋白的分子量相差不多,现在用分别用过C4和C18的柱子试过。。。流动相分别是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈,利用梯度洗脱。。。现在两个峰的出峰时间只相差零点几秒。。我有放缓冲洗的梯度、改变流速。。。希望大侠给点意见。。。不胜感激呢。。。。
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dahua1981
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cy_win
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原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
实在不行就换柱子了

谢谢。。。有哪些柱子?可以给个建议吗?
尐虎ル)ㄣ灬
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你可以试试改变一下PH值和有机相的比例,让出峰时间晚一点,可能更有利于你的检测。
qiaolee744
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分子量相差不多?
到底差多少
如果分子量相差不是太小,可以考虑凝胶色谱柱(TOSOH柱)
daoyuanli
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原文由 qiaolee744(qiaolee744) 发表:
分子量相差不多?
到底差多少
如果分子量相差不是太小,可以考虑凝胶色谱柱(TOSOH柱)


分子量差不多的话试试离子交换吧。
SEC肯定是不行的,分子量的差别至少在两倍以上才可以用SEC分开的。
tianru的爸爸
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如果分子量差不多,而C4和C18的差距也不大,那就是说凝胶和反相都不能很好地分离;
那就换离子色谱法吧。
maldiguy
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一定要分开么?对不是太复杂的蛋白混合物,很容易用质谱鉴定的
可以尝试SCX (阳离子交换)
lizihua02
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