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新色谱柱的处理
对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的溶剂中，通常是60-80%的甲醇/水，这与在反相色谱中使用的流动相是兼容的，所以可以直接转换到所要使用的流动相。另外，也可以先用20-30ml流动相中的强溶剂甲醇、乙腈或者四氢呋喃冲洗色谱柱，然后再转换到所需流动相。需注意的是，在冲洗或平衡色谱柱时，重要的是溶剂的体积而不是冲洗时间。提高流速可以缩短冲洗平衡时间。
如果使用有机溶剂和水或缓冲溶液，10倍柱体积的流动相可以使色谱柱达到冲洗平衡。如果流动相使用离子对试剂，则需20-50倍柱体积的流动相。对于直径4.6mm的色谱柱，其柱体积可以按下式估算：
Vm=0.1L
其中，Vm为柱体积（ml），L为色谱柱的长度（cm）。故一个15cm x 4.6mm色谱柱大概的柱体积为1.5ml。直径2.1mm的色谱柱的柱体积大约为4.6mm的20%，所以5cm x 2.1mm的色谱柱含溶剂为100uL。
3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？
答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
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