卢老师,您好,对于色谱柱使用,通常不建议反接,除非迫不得已,您在这提出色谱柱“正用反冲”观点,无疑与传统观点相冲突。
在这我也小小的质疑下:
首先你的观点中,污染主要集中在色谱柱入口处,如果正向冲洗势必造成色谱柱的二次污染,如果反向冲洗,可以直接把污染物从色谱柱中冲走。从这一角度来说,色谱柱经常正反交替使用是否会更好些了,这样可以尽量减少色谱柱柱身的污染?
你的观点中色谱柱长期受一个方向冲击会造成松懈。虽然色谱柱技术很成熟,正常情况下色谱柱内部很实在,但长时间使用确实也存在一个填料流失的问题。在低流速下反向冲洗色谱柱,可以使色谱柱填料重新分布(其实这是否会再一次造成填料流失我觉得值得商讨),似乎短期可以达到一个比较好的状态,但我个人以为填料的流失是硬伤,在走样时间稍微长些时候(尤其是流速还比较大的时候),色谱柱应该又恢复至反冲之前的水平,甚至不如以前。
有些色谱柱两端的孔径不一致,反冲会导致填料的流失,有的厂家装柱技术一般,色谱柱都是用高压泵填充,那么势必会造成色谱柱最下端最紧密,越靠近入口处越相对松散,如此是否也会造成填料流失了?所以我觉得要视柱子以及情况而定
关于冲洗柱子,我想现在的想法是 低流速长时间冲洗,直到压力下降到合适的状态。如果低流速长时间冲洗,压力还是居高不下,不如采取“反向冲洗”的办法,或者学论坛上一些达人,拆下柱子入口端,填料是白色的,超声下筛板,如果填料是黑的,挖去黑的,从新装填同类型的新填料(这也是不得已的办法哦),这样也是伤柱子的,谨慎使用。
实际操作中,我们也有过反向冲洗色谱柱,但走样时间长些,色谱柱就吃不消了,不知道是否与我上面说的原因有关系,而且柱子一经反接寿命就不长了。卢老师是否也遇到过这样问题,如果没有不妨把你的色谱柱型号以及具体如何冲洗色谱柱、流动性以及梯度等等拿出来和大家分享下……道理是越探讨越明,希望卢老师不要介意