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主题：【讨论】【百家争鸣第六期】您如何去除血液样品中脂肪和蛋白？

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eben77
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2011/11/9 11:06:55 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
脂肪和蛋白质分子通常较大，如果目标是小分子，可以使用凝胶渗透色谱。
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xihe
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2011/11/15 13:27:27 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有对脂肪加以考虑，因为一般都是血样，主要考虑除蛋白。液液萃取和有机溶剂蛋白沉淀法。做的量多有机溶剂就用甲醇，乙腈太毒。
也有一次为了发表文章使用了固相萃取柱
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:06:19 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 netsking(netsking) 发表:
原文由 guby(guby) 发表:
脂肪通过冷冻离心，蛋白通过加热80摄氏度吧！再者家沉淀剂。

煮鸡蛋的方法一定是很不错的. 只是不知道要分析的东东是不是热稳定. 而且那么多东东在一起煮, 可要比"鸡蛋"复杂多了


我看到的方法学，很少采用加热去处蛋白的，主要还是怕物质受热不稳定或者挥发。有时氮吹时都不敢开过高的水浴加热温度，更不要谈加热到80摄氏度去蛋白了。
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:08:28 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xiaowang268(xiaowang268) 发表:
用有机溶剂沉淀。离心。过膜


如果是全血的，一般用哪些有机溶剂沉淀？要不要根据物质的性质选取不同的有机溶剂？另外，有没有试过同时改变pH的做法？
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:11:21 15楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 eben77(eben77) 发表:
脂肪和蛋白质分子通常较大，如果目标是小分子，可以使用凝胶渗透色谱。


恩，不少有采用GPC的，但GPC也挺麻烦，废溶剂多、通量小，过完后还要旋蒸
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:23:29 16楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xihe(xihe) 发表:
没有对脂肪加以考虑，因为一般都是血样，主要考虑除蛋白。液液萃取和有机溶剂蛋白沉淀法。做的量多有机溶剂就用甲醇，乙腈太毒。
也有一次为了发表文章使用了固相萃取柱


如果是全血的话，也是要考虑除脂的。xihe版主主要做血清还是全血？

想请问一下，如果全血中有中极性的物质和极性物质，会采用什么样的溶剂组合进行液液提取？
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:25:06 17楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xihe(xihe) 发表:
没有对脂肪加以考虑，因为一般都是血样，主要考虑除蛋白。液液萃取和有机溶剂蛋白沉淀法。做的量多有机溶剂就用甲醇，乙腈太毒。
也有一次为了发表文章使用了固相萃取柱


到底是甲醇的毒性大还是乙腈的毒性大？
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小猪飞飞
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2011/11/23 13:28:26 18楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xihe(xihe) 发表:
没有对脂肪加以考虑，因为一般都是血样，主要考虑除蛋白。液液萃取和有机溶剂蛋白沉淀法。做的量多有机溶剂就用甲醇，乙腈太毒。
也有一次为了发表文章使用了固相萃取柱


为了发文章用的固相萃取柱？跟不用SPE的效果比呢？
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bigpalewolf
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2011/11/27 12:07:54 19楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般用乙腈或者甲醇直接沉淀蛋白质。回收率低的用液液萃取， 还不行就用SPE.
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小猪飞飞
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2011/11/28 9:21:02 20楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 bigpalewolf(bigpalewolf) 发表:
一般用乙腈或者甲醇直接沉淀蛋白质。回收率低的用液液萃取， 还不行就用SPE.


如果是全血的话，加入乙腈后会出现血液立即凝结成块的现象，不利于后面的提取
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