主题：【讨论】关于农残提取

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2012/4/19 10:30:07 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

5．农药残留的净化技术

在样品的提取液中，除了农药残留外，还有色素、油脂或其他天然物质，在测定前须去除这些干扰物质，这就是净化。

由于农药种类不同，采用的检测器也不同。各种检测器对净化液程度的要求也不互相间。ECD放射源易受污染，对净化要求高，FPD对净化要求不高，采用简单的方法净化就可以了。

液-液分配：在一组织不相溶的溶剂对中，溶解某一溶质成分，这种溶质以一定比例分配在溶剂的两相中。在两相溶剂中的分配比称为分配系数。如此反复分配，便可使不同的物质组分得到分离，从而达到净化的目的。分配时溶剂体积及提取次数，必须根据P值进行计算。P值指在一组等容积互不相溶的溶剂对，溶质以一定比例分配在溶剂的两相中，该比值即为该物质对该组溶剂的P值。

1乳化的解决：溶液分配过程中，往往会出现乳化现象，如不很好的解决，会影响分析结果的准确性。1.加入饱和硫酸水溶液：由于溶液中有大量的硫酸钠离子存在，盐析作用可以使乳化层破坏，（也可以加入适量的氯化钠）。2.加入1：的硫酸水溶液，加入量由10毫升、20毫升、30毫升逐步增加，乳化可以减轻或消除，此法只适用于对酸稳定的农药。3.采用高速离心，破坏乳化层，消化乳化现象。4.根据样品的情况添加，如蜂蜜和炼乳类，可以加草酸钾，茶叶类的可加入丙酮或甲酸，含糖样品，可以加入丙酮。

2．在多残留分析中常用极性不同的溶剂体系，把各种农药淋洗入不同的洗提馏分中，使农药得到分组分离，然后测定。

MILLS等提出的淋洗体系为A、B、C3种极性依次增大的体系：A液：二氯甲烷：甲醇（19：1）的淋洗体系，分离水果和蔬菜中的一些磷酸酯、有机氯、甲基氨基甲酸脂、苯基氨基甲酸脂和脲类农药。

黄士忠等研究采用内径1.5厘米，长18厘米的玻璃层析柱，在柱底部填入少量玻璃棉，先装入4克无水硫酸钠，然后再将入5克处理过的弗罗里硅土，稍加打实，最上层加4克无水硫酸钠。该柱先用30毫升二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3：1）预淋，待预淋液面进入上层无水硫酸钠时，将待净化的浓缩液移入柱中，弃去收集的预淋液，待上液面接近上层无水硫酸钠时，先用50毫升含10%乙醚的石油醚淋，再用120毫升二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3：1）淋洗，控制流速3~4毫升/分，收集二次淋洗液、浓缩、定容。此法分离了土壤和粮食中10种有机氮类农药，其回收率为85~101%。

3．酸净化：是化学处理净化的一种方法，它可以有效去除脂肪、色素和杂质。此法只适用于对酸稳定的农药。

4．凝结净化法：根据一些有机磷和有机氮农药对净化要求不严格和偏酸性条件下稳定的特点，采用凝结净化法进行净化。在含有30%丙酮或乙腈提取液中加入10~13 毫升的凝结液（20克氯化铵和85%磷酸40毫升溶于400毫升蒸馏水中配置，再稀释5倍）和1克助滤剂，振摇15~20次，静止5分钟，过滤，根据杂质和色素的含量，确定凝结的次数。在滤液中加入适用氯化钠（防止乳化），用（50*3）毫升二氯甲烷萃取3次，合并有机相，浓缩、定容。

5．其它：氧化铝层析法、活性炭和混合柱净化法等等

二、一般试剂的要求、纯化、活化和灭活

1. 水：取100毫升水，用10毫升石油醚提取，取5微升石油醚提取液，进行分析，在色谱图上，除石油醚溶剂峰外，无其他杂质峰。

2. 中性氧化铝（层析用），在550℃灼烧4小时密封保存，用前于130℃烘5小时，储存于干燥器中备用。

3. 弗罗里硅土（60~80目）在600~650℃灼烧3小时，用前于130℃烘5小时，储存于干燥器中备用。弗罗里硅土（Florisil,硅镁吸附剂）是一种合成的硅酸镁，具有很大的表面积，活化3小时以上，然后放在干燥器中避光保存。使用前最好再于130℃下活化过夜，至少加热5小时，用玻璃盖瓶后于130℃处保存或者置于干燥器中。如在室温下保存2天后，需于130℃重新加热。加2%水降活（按重量计）弗罗里硅土，既使用含有30%二氯甲烷的已烷液作为淋洗溶剂，可吸附1克油或脂肪。如用含有10%二氯甲烷的已烷淋洗时，甚至可吸附2克油或脂肪。

弗罗里硅土活性的测定：通常认为，1克硅酸镁将要吸附100毫克分子量为200的化合物，则活性比较合适。选用月桂酸作为被吸附的物质。月桂酸分子量在200左右，是固体，比较容易提纯，易溶于已烷中、用酸碱滴定法可以直接测定，操作步骤如下：

将2.000克弗罗里硅土放入25毫克标准磨口锥形瓶中，盖上铝箔，在130℃下加热过夜，加塞后冷却至室温，加20毫升月桂酸溶液（内含月桂酸400毫克），塞好后间歇地振荡15分钟。等吸附剂沉下后，吸取上清夜10.0毫升，移入125毫升锥形瓶中。吸取的上清夜中不应带入弗罗里硅土。加入中性酒精50毫升和酚酞指示剂3滴。用0.05氢氧化钠溶液滴定至终点。称取100～200毫克月桂酸，在相同条件下，用0.05N氢氧化钠溶液进行滴定。确定每毫升0.05N氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数，则每克弗罗里硅土所吸附的月桂酸值按下式计算:

每克弗罗里硅圭所吸附的月桂酸的毫克数(月桂酸值)=200-(滴定的0.05N氢氧化钠的毫升数*每毫升0.05N氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数)

4. 硅胶(60~120目)630℃2小时,冷却至50~60℃3-5%水振摇,密封保存。

5. 无水硫酸钠（分析纯），在700℃灼烧4小时，密封保存。

6. 脱脂棉，将脱脂棉发入大号索氏提取器中，加4%丙酮-正已烷，在水浴上回流4小时后，在通风橱内让其自行挥发干

7. 溶剂：取300毫升溶剂，放入旋转蒸发器中浓缩近干（约1毫升），取1微升注入GC，在色谱图上，除溶剂峰外，无其他杂质峰。提纯方法很复杂，建议直接购买农残级试剂使用。

石油醚沸程为30~60℃主要该60~90℃90~120℃，其主要成分为脂肪族烃类的混合物；丙酮沸程为55~57℃；乙酸乙酯沸程为76.5~77.5℃；乙腈沸程为81~82℃，可与水、醇和醚任意混合，毒性很大；二氯甲烷39~41℃；甲醇64~66℃

三、提取效果的评价

在实验室中，一般对提取方法的评价是通过添加回收实验来量化的。一般固定“净化”和“测定”条件，而变换前面的“提取”条件，来比较“提取”效果的。不足的是比真正的提取率要高。

还有一种完全提取法，采用与农药极性相似的提取溶剂，长时间索氏提取。然后与选择的方法对比。如果两种方法的结果相近，则认为所采用的提取方法有效。

采用同位素的化学性质一致性的原理，把农药分子中的原子换成放射性同位素，使农药带上标记，此方法有直接了解提取的效果。国内使用不多。

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2012/4/19 10:34:41 Last edit by mcds

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2012/4/19 14:03:30 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1． 最低检出浓度：也叫最低检出限，表示用添加法能可靠地实际检测出待测农药的最低含量（以mg/kg），最低检出溶度必须低于或等MRL值。以色谱法为例，最低检出浓度与最小检出量、样本溶液定容体积、样本溶液进样体积、称样重量相关，以下式表示。

最低检出浓度（mg/kg）=最小检出量（mg）*样本溶液定容体积（ml）

样本溶夜进样体积(ul)*称样质量（g）

根据检测目的衡量检测方法最低检出浓度是否符合要求，若为了与规定的最高残留量（MRL值）比较，以判断被检样本残留量是否超标时，一般要求最低检出浓度低于MRL值一个数量级（10倍）即可。若规定的MRL很低（小于或等于0.05mg/kg）时，则最低检出浓度小于或等于MRL值即符合要求，最低检出浓度与规定的MRL值的关系见下表。

最低检出浓度（mg/kg）	0.001	0.005	0.01	0.02	0.02	0.04	0.1	0.1	0.2	0.5	1.0
MRL值（mg/kg）	0.001	0.01	0.02	0.05	0.1	0.2	0.5	1	2	5	10

2.回收率　用添加法测定回收率，原则不添加浓度以接近待测样本的农药含量为宜。但由于待测样本中的农药残留量是未知的，因此，一般以该样本的最高的残留量（MRL值）和方法最低检出浓度10倍的浓度做添加浓度。若没有MRL值与最低检出溶度之间的浓度作为添加浓度，即添加回收率试验必须选3个添加浓度。若没有MRL值参照时，以最低检出浓度和高于最低检出浓度10倍的浓度做添加回收率，每一个浓度进行3次以上的重复试验。添加回收率结果应以接近100%为佳，但由于杂质干扰，操作误差等诸多因素的影响，实际结果会有很大偏差，添加回收率70~110%，平均回收率>80%为满意结果。不同添加浓度要求回收率范围如下。

添加浓度/(mg/kg) 回收率/%

>0.1 80~110

0.01~0.1 70~110

0.001~0.01 60~120

<0.001 50~120

3.相对标准偏差（RSD）或变异系数：是标准偏差在平均测定值中所占的百分率，也叫变异系数。在进行添加回收率实验时，对同一浓度的回收率试验必须进行至少三次重复。平均实验结果偏差与添加浓度相关，添加浓度愈低，允许偏差愈大，不同添加浓度回收率实验所要求的相对标准偏差如下。

添加浓度/（mg/kg）相对标准偏差/%

1~10 10~25

0.1~1 25~50

0.01~0.1 50~100

相对标准偏差计算公式如下。

∑(检测值-平均检测值)²

相对标准偏差（RSD）= 检测次数-1（n-1） ×100%

平均检测值（X）

4．确证实验：报告检测结果之前应需进行确证实验，以免做出错误结论。对待测农药进行定性定量的方法有以下几种：（1）改变测定条件或方法（如色谱法改用光谱法）；（2）改变检测器；（3）改变色谱柱；（4）薄层析法；（5）衍生化法；（6）气-质或液-质联用技术；（7）生化测定技术（酶抑帛法、酶联免疫法）等，可根据检测目的和待测农药种类以及实验室的仪器条件和技术专长等选择有效的确证方法。

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