主题：【第六届原创】乳粉中蛋白质的测定

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木子

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发表于：2011/12/18 19:25:43 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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乳粉中蛋白质的测定：

依据：GB5009.5—2010

我们采用国标中的第一法：凯氏定氮法

实验原理：食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或烟酸标准滴定溶液滴定，根据酸消耗量诚意换算系数，即为蛋白质的含量。

所需要的试剂：

1.硫酸：密度为1.84L

2.硫酸铜

3.硫酸钾

4.硫酸标准滴定溶液：盐酸或硫酸标定溶液0.0500mol/L

5.硼酸溶液：称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000ml

6.氢氧化钠：称取40g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100ml

7.甲基红乙醇溶液：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml

8.亚甲基蓝乙醇溶液：称取0.1g亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml

9.溴甲酚绿乙醇溶液：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100ml

10.混合指示剂：2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合，也可以1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液，临用时混合

试样处理：

1称取2g奶粉样品 + 0.2g硫酸铜 + 6g硫酸钾 → 于凯氏烧瓶中（为了防止药品和样品附着在凯氏烧瓶壁

上，用硫酸纸包好在放入凯氏烧瓶中）

2.将20ml硫酸缓慢加入到凯氏烧瓶中，将凯氏烧瓶以45°角斜体支到电炉上面，小心加热

3.待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力

4.并保持瓶内液体沸腾，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，继续加热0.5~1小时。

5.取下放冷

6.放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水清洗凯氏烧瓶，洗液并入容量瓶，加水至刻度混匀备用。同时做空白试验

测定：

1.按图装好定氮蒸馏装置，向水蒸汽发生器内装水至2/3处，加入数颗玻璃珠，加甲基红乙醇溶液数滴及毫升数密度为1.84L硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸汽发生器内的水并保持沸腾

2.向接收瓶内加入10ml硼酸溶液及1~2滴混盒指示剂，并使冷凝管的下端插入页面下，根据试样中氮含量，准确吸取2.0ml~10ml试样处理液由小玻杯注入反应室，以10ml水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞进棒状波塞，将10ml氢氧化钠带入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏接收瓶。以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至终点

3.其中2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液指示剂，颜色由紫红色变为灰色，PH5.4。1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液指示剂，颜色由酒红变成绿色，PH5.1，同时做试剂空白。

分析结果表述：