原文由 dinghailiang(dinghailiang) 发表:
胸腺法新有关物质用什么色谱柱,2010版药典标准,光说C18柱,不知道用什么填料,孔径,内径,粒径,长度等,试用了好多柱子不行都,谁做过这方面的应用啊,
我来普及一点色谱知识;
选择色谱柱有几个指标,C含量,比表面积,孔径,粒径。
C含量高说明键合的较完全,想对于来说对于非极性物质保留会强;
比表面积大,说明活性位点多,对样品吸附越强;
孔径就是可以让样品分子进入填料,接触活性位点。举个简单例子,如果属于大分子,如果孔径太小,分子进不去,就会出现从硅胶颗粒缝隙留出,出现不保留的现象;
粒径,这个好理解,粒径越小柱效越高,分离度越大,同时系统压力也大;
对于如何选择色谱柱:
1、首先有困难找百度,通过查询相关文献去找类似的色谱柱;
2、如果第一条不好用,可以把样品给色谱柱的厂家,让厂家帮你选择,这个时候提醒一点,选择有独立键合能力的色谱柱厂家,为了是保证色谱柱重现性较好;
3、如果想自己开发,那么我讲一点。首先看样品的性质,属于水溶性还是脂溶性,选择反相柱还是正相柱;
如果确定反相柱,C18种类很多。首先看你样品结构,如果水溶性较强,选择亲水的C18或者离子交换;
进一步通过样品分力量确定色谱柱孔径;
最后通过调节流动相,来调节样品峰型,是否需要缓冲盐,或者酸性碱性,来避免样品分解,色谱柱流失,二次保留等问题;