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现在固相萃取的应用越来越多,好处不多说了,而且固相萃取住基本都是一次性的,会出现各种各样的问题。下面列举了一些常见的问题,即兴想的,如果还有其它问题,跟帖,我尽量挑着会的回答。
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列举之前,先说一些建议:
1、选择正规的固相萃取厂家,可以保证spe柱的稳定;一般认为具有独立键合能力的厂家比较稳定;
2、认真对待固相萃取的过程;
3、如果有条件,可以选择一款自动的固相萃取仪器;
话不多说了,下面列举问题:
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红色字体是解决办法;
1、目标化合物回收率低:(1) spe柱没有很好的预处理; 选择合适的溶剂活化spe柱,如果有需要避免spe柱干涸;(2) Spe柱极性不合适;选择对目标物有明显选择性的spe柱;(3) 目标化合物对样品的亲和力大于与spe柱的亲和力;改变极性或者样品的ph使目标物在样品中的亲和力降低;(4) 当大体积样品经过spe柱时候,spe柱填料的活性降低;在样品中添加少量的活化液;(5) 洗脱溶剂强度不够强,无法将目标物从spe柱上洗脱;改变洗脱强度或ph,增加洗脱溶剂对目标物的亲和力,或者破坏spe柱和目标物之间作用力;(6) 洗脱溶剂体积太小;增加体积;(7) 淋洗液强度太大;更换淋洗液种类;(8) 目标物不可逆吸附在spe柱上;这个就困难了,只能更换spe柱;(9) 目标物保留不完全;考虑流速、柱容量;2、固相萃取重现性差:(1)样品添加到spe柱的时候,spe柱已经干涸;重新对spe柱进行活化;(2)Spe柱超容量;降低样品量或者增加大规格spe柱;(3)样品过柱流速不稳;降低流速;(4)洗脱液流速太快;降低流速,或者洗脱液分2次洗脱;(5)目标物在样品中的溶解度太大,样品过柱时与样品同时过柱,保留不完全;改变样品极性或者ph而改变目标化合物的溶解度;(6)Spe柱用极性溶剂处理而洗脱溶剂是不兼容的非极性溶剂;洗脱之前充分干燥spe柱;(7)淋洗液清洗杂质的同时清洗掉部分目标物,取决于流速、spe柱、极性等;降低淋洗液强度;(8)洗脱体积小;增大洗脱体积;3、洗脱的馏分含有干扰物:(1)干扰物与目标物同时被洗脱;选择合适的淋洗液清洗杂质;选择合适亲和力的spe柱;(2)干扰物来自spe柱;充分预处理spe柱;用两根不同极性的spe柱除去干扰物;4、spe柱流速降低或阻塞(1)样品中存在大量颗粒物;对样品进行离心,过滤;(2)样品溶剂粘度大;对样品进行稀释;5、用反相柱从含有蛋白的基质中萃取目标物:(1) 目标物和蛋白质建合使分析物通过spe柱而没有保留;通过改变样品中的ph或者用水对样品稀释破坏蛋白键合;加酸去除蛋白质;加入有机溶剂去除蛋白质,离心后用水或缓冲盐将上清液稀释至有机溶剂含量少于10%;6、用常规柱萃取蛋白质的回收率低:(1) 蛋白质体积太大不能进入萃取柱的微孔;用大孔柱或者离子交换柱;(2) 蛋白质不可逆的被吸附在反相spe柱上;蛋白质在spe柱担体微孔内变性;用大孔柱或离子交换柱;有说的不对的,指出来,我会修改。
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还有如果上述不能解决你的问题,我有绝招:
1、有困难找百度;
2、有困难找厂家,你告诉他,给我做好了应用,我就买你家柱子,一般厂家不会拒绝的;