主题：【求助】关于样品在buffer里的形态问题的困扰

原文由 nini2006(nini2006) 发表:
大家都知道，如果分析物HAc是弱酸，则当buffer的pH<pKa的时候，分析物的存在形式是HAc；pH=pKa时，则HAc和Ac^-同时存在;pH>pKa时，以Ac^-形式存在。



我目前同时分离20种东西，其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH，所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的（也就是一种样有两个峰）。同时，有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况？如何解决？

原文由 cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:

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大家都知道，如果分析物HAc是弱酸，则当buffer的pH<pKa的时候，分析物的存在形式是HAc；pH=pKa时，则HAc和Ac^-同时存在;pH>pKa时，以Ac^-形式存在。



我目前同时分离20种东西，其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH，所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的（也就是一种样有两个峰）。同时，有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况？如何解决？

你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳，很容易出现你说的现象。两个方法，1，选择一个PH，要大于或小于所有的PKA两个单位，这样保证样品以一种离子态存在，2，引入其他分离因素，比如胶束，比如手性拆分剂，比如有机改性剂等。

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大家都知道，如果分析物HAc是弱酸，则当buffer的pH<pKa的时候，分析物的存在形式是HAc；pH=pKa时，则HAc和Ac^-同时存在;pH>pKa时，以Ac^-形式存在。



我目前同时分离20种东西，其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH，所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的（也就是一种样有两个峰）。同时，有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况？如何解决？

你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳，很容易出现你说的现象。两个方法，1，选择一个PH，要大于或小于所有的PKA两个单位，这样保证样品以一种离子态存在，2，引入其他分离因素，比如胶束，比如手性拆分剂，比如有机改性剂等。

我现在用的就是胶束电泳，选则个pH实在是不得已而为之，因为分离的东西多，pKa范围拉得很大。
实验证明，在这个pH值下，一个分析物的几种形态是同时存在的，因为跟空白对比，单个分析物确实出现了几个峰，只是一个主峰，其他两个峰非常的小。

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大家都知道，如果分析物HAc是弱酸，则当buffer的pH<pKa的时候，分析物的存在形式是HAc；pH=pKa时，则HAc和Ac^-同时存在;pH>pKa时，以Ac^-形式存在。



我目前同时分离20种东西，其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH，所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的（也就是一种样有两个峰）。同时，有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况？如何解决？

你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳，很容易出现你说的现象。两个方法，1，选择一个PH，要大于或小于所有的PKA两个单位，这样保证样品以一种离子态存在，2，引入其他分离因素，比如胶束，比如手性拆分剂，比如有机改性剂等。

我现在用的就是胶束电泳，选则个pH实在是不得已而为之，因为分离的东西多，pKa范围拉得很大。
实验证明，在这个pH值下，一个分析物的几种形态是同时存在的，因为跟空白对比，单个分析物确实出现了几个峰，只是一个主峰，其他两个峰非常的小。

胶束电泳我做过，它的前提是只有分子态的才可以进入胶束，离子态的不可以。并且胶束不同数量的其他分子，对总的结合物影响不同。即一个胶束结合10个分子和100个分子后形成的复合物是不同的，达到一定数量后就会出两个峰，同理也会出许多峰。出现这种情况，可以适当降低胶束的使用浓度，或增加样品使用量，目的就是达到胶束和样品分子形成复合物的均一性。大家可以继续交流，邮箱：zgj_0443712@yeah.net，必要的时候可以贴图上来，大家好分析！

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我目前同时分离20种东西，其中有几种种分析物的pKa正好等于或接近于buffer的pH，所以我怀疑我目前得到的谱图中会有几对峰是分别属于这几种分析物的（也就是一种样有两个峰）。同时，有可能有些样的另外一种形态的峰跟其他物质的峰重叠在一起没有分开。有没有人遇到过这样的情况？如何解决？

你这样选择和PKA 接近的PH犯了很大的忌讳，很容易出现你说的现象。两个方法，1，选择一个PH，要大于或小于所有的PKA两个单位，这样保证样品以一种离子态存在，2，引入其他分离因素，比如胶束，比如手性拆分剂，比如有机改性剂等。

我现在用的就是胶束电泳，选则个pH实在是不得已而为之，因为分离的东西多，pKa范围拉得很大。
实验证明，在这个pH值下，一个分析物的几种形态是同时存在的，因为跟空白对比，单个分析物确实出现了几个峰，只是一个主峰，其他两个峰非常的小。

胶束电泳我做过，它的前提是只有分子态的才可以进入胶束，离子态的不可以。并且胶束不同数量的其他分子，对总的结合物影响不同。即一个胶束结合10个分子和100个分子后形成的复合物是不同的，达到一定数量后就会出两个峰，同理也会出许多峰。出现这种情况，可以适当降低胶束的使用浓度，或增加样品使用量，目的就是达到胶束和样品分子形成复合物的均一性。大家可以继续交流，邮箱：zgj_0443712@yeah.net，必要的时候可以贴图上来，大家好分析！