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主题：【原创】黄曲霉毒素B1的检测

浏览0 回复25 电梯直达
木 子
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发表于：2012/01/31 23:12:38 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被〓疯子哥〓设置为精华； 奖励积分记录： 〓疯子哥〓(10分)
黄曲霉毒素M1是黄曲霉产生的毒素，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。


黄曲霉毒素B1的简介：黄曲霉毒素是多种霉菌产生的有毒代谢物，主要包括四种呀型（黄曲霉
                  毒素B1、B2、G1、G2，其中B1毒性最强，是主要的检测类型，但若其
                  他类型的浓度高，同样具有很大危害性）。它存在于谷物、坚果、棉花
                  籽及其他食品或饲料中，具有致癌性 ，可导致人罹患肝癌、黄曲霉毒素
                  中毒、瑞氏综合征和其他慢性疾病；动物可通过进食被污染 的饲料接触
                  到黄曲霉毒素。因此，大多数国家都限制食品或饲料中黄曲霉素B1的
                  含量

检测原理：黄曲霉毒素B1检测试剂盒采用固相直接竞争性酶联免疫原理。微孔中包被有对黄曲
        霉毒素B1具有高亲和力的抗体。黄曲霉毒素B1酶标物与标准品或样品的黄曲霉毒素
                    B1竞争结合微孔中包被的抗体。孵育一定时间后，倾倒微孔中的内容物，洗涤非特
        异性反应物。随后加入底物试剂，溶液变为蓝色。颜色强度与黄曲霉毒素B1酶标物
        的量成正比，与样品或标准品中黄曲霉 毒素B1的 浓度成反比。最后加入酸性终止
        液，终止反应并将微孔中溶液颜色变为 黄色，使用酶标仪在450nm下测微孔中溶液
        的OD值。比较样品OD值与试剂盒提供的标准品的OD值,即可获得检测结果。

下面带大家检测饲料中黄曲霉毒素B1的含量：









样品处理：
1.稀释孔中+200ul酶标物+100ul标准品/样品



2.混匀吸打，只少3次


3.从每个稀释孔中吸取100ul混合液，转移至相应抗体包被微孔中

4.室温孵育15min


5.孵育完成后，用洗板机洗涤4次


6.根据样品标准品个数计算所需底物体积，将所需底物体积置于单独容器中
  然后移取100ul底物至每个微孔中

7.室温下孵育5min（下图是孵育5min后的颜色变化图,颜色由之前刚加入的浅蓝变为深蓝）


8.计算样品和标准品所需终止液的体积，将所需终止液体积置于单独容器中，然后按照与底物
  相同的添加顺序和速度，向每个孔中加入100ul终止液




9.用酶标仪在450nm下读取并记录每个微孔的OD值


10.
该帖子作者被版主 嘟嘟妮小贝加 10积分， 2经验，加分理由：值得借鉴
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2012/2/1 6:59:45 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们也是用这种方法来检测黄曲霉B1的，不过现在国标要求用液相+衍生化系统来检测啊
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iycc
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2012/2/1 13:08:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法基本一致，我们现在的检测量也很大！
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kitaro
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2012/2/1 15:30:59 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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该帖子作者被版主 plum加 3积分， 2经验，加分理由：谢谢提醒~
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木 子
plum
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2012/2/1 19:47:16 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kitaro(kitaro) 发表:
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哈哈 谢谢这位版友的提醒，以后实验会戴的~
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2012/2/1 21:42:31 Last edit by binglang1985
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2012/2/1 21:42:42 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
哪家的酶联免疫试剂盒要性价比好些？
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天天洗碗
binglang1985
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2012/2/1 21:57:09 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有快速试纸片法吗？
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senw
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2012/2/2 9:08:08 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
呵呵，工作量好大啊！
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千层峰
jxyan
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2012/2/2 9:29:12 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
黄曲霉素 检测起来 确实很繁琐。。
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嘟嘟妮小贝
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2012/2/2 13:39:41 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们用的也是酶标法测定的，
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energy911
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2012/2/2 17:31:58 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个快，国标饲料是用薄层色谱做的，要展开，很麻烦
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2012/2/2 19:07:00 Last edit by binglang1985
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