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主题：【资料】制备色谱的放大

浏览0 回复13 电梯直达
sally0326
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发表于：2012/03/28 14:36:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
无意中看到艾杰尔的Flash手册，有纯化放大方面的知识，给大家分享下，嘿嘿~~

制备高压液相纯化过程流程图 ：



在制备高压液相中，首先用分析柱对分离进行优化。当优化条件确定后，在分析柱上进行上样量的研究，以确定特定填料的容量。

如果使用相同填料而且洗脱线速度相同，大规模分离与小规模分离的过程是等同的。因此分析柱上的上样量确定后，使用如下公式计算放大倍数，分析柱上的上样量乘以放大倍数就是计算出的制备柱的上样量。当然，最大上样量依然取决于样品的复杂程度。



还有一些需要考虑的因素对上样量也有影响：

l        强保留的组分有更高的上样量。

l        简单的样品基质有较高的上样量。

l        有高分辨率要求时，要减小上样量。

l        上样体积超载会降低分辨率和纯度。

l        注意溶解样品的溶剂。强溶解溶剂将会破坏洗脱过程并降低分辨率。

l        样品溶解度影响上样量。

举例：

当把Agela XBP C18 4.6 x 150 mm 分析柱放大到XBP C18 50 x 250 mm 的制备柱时，放大倍数的计算如下：



如果确定分析柱的上样量为10mg, 那么在制备柱上的上样量则为:

10 x 197 = 1970 mg.

如前所述，制备柱的洗脱线流速（m/s）应与分析柱一致，因此，制备的流速（mL/min）应按以下公式计算：




但是，系统的硬件条件仍然需要考虑，因为流速增大、柱长的增加及小粒度填料的使用会对系统产生相当大的背压。

线性梯度洗脱在当今制备液相中是常见的，由分析柱放大至制备柱时，如果制备柱与分析柱不等长，梯度洗脱时间也应该按如下计算做相应的调整：
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valentinayuan
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2012/3/29 10:08:17 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先收藏着，有时间再看
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zjzy
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2012/3/29 22:54:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没放大过哦，学习啦……
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xiongbb
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2012/3/29 23:20:42 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般来说理论的放大不靠谱吧，还是和实际情况来确定，毕竟分析和制备检测器上差很多东西吧。不是很懂
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sally0326
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2012/3/30 8:34:37 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:
一般来说理论的放大不靠谱吧，还是和实际情况来确定，毕竟分析和制备检测器上差很多东西吧。不是很懂


确实是这样的，理论的放大和实际不相符合，但是有一定的参考意义，所以可以了解。
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yigaozizi
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2012/3/31 12:55:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分析柱需要优化的条件有哪些呢？
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sally0326
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2012/3/31 15:44:28 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yigaozizi(yigaozizi) 发表:
分析柱需要优化的条件有哪些呢？


保留时间、分离度、流动相等
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yigaozizi
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2012/3/31 22:02:43 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sally0326(sally0326) 发表:
原文由 yigaozizi(yigaozizi) 发表:
分析柱需要优化的条件有哪些呢？


保留时间、分离度、流动相等
对制备色谱不大了解。想再问个问题，在分析柱上优化好流动相条件等之后，能将这些条件照搬到制备色谱上吗？例如分析柱在甲醇：水1:1下，10min目标物开始出峰，那么同样长度的制备柱在同样的条件下，收集10min的组分就会是目标物了吗？会不会有偏差呢？
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liuwei10987
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2012/4/1 19:34:51 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
制备条件放大需要看实际情况，检测器的检测限、色谱柱的柱效、样品在设定波长下的响应值大小，等等。
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gaoshan_lanjing
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2012/11/6 13:53:17 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sally0326(sally0326) 发表:
原文由 xiongbb(xiongbb) 发表:
一般来说理论的放大不靠谱吧，还是和实际情况来确定，毕竟分析和制备检测器上差很多东西吧。不是很懂


确实是这样的，理论的放大和实际不相符合，但是有一定的参考意义，所以可以了解。


真的不符吗？有没有实际的例子给大家分享一下？
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maple
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2012/11/7 21:35:48 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于制备液相的放大问题上面提及得非常好，不过还是要在实验中自己总结
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