主题：【求助】扫描电镜预处理方法（生物膜）

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

生物膜也是和细胞差不多，能说一下具体的做法吗？

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

生物膜也是和细胞差不多，能说一下具体的做法吗？

主要看你样品了，一般按照以下程序进行：取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

1、取材就不说了
2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯（1:1）脱水的，也有用梯度酒精逐步脱水的
4、干燥。有冷冻干燥的，也有用乙腈干燥的。
5、导电处理。也不说了。

我当时看的就是生物材料上的细胞，1、取材没什么麻烦，要是看细胞组织，可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的（有些文献说2h就OK~，你可以尝试下看看）。3、脱水用的是25%，50%，75%，95%，100%的酒精一次浸泡15min（不放心的可以降低酒精梯度~~，多泡几次）。4、干燥采用的是冷冻干燥。  以上方法仅供参考哈，你也可以查查相关文献。

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

生物膜也是和细胞差不多，能说一下具体的做法吗？

主要看你样品了，一般按照以下程序进行：取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

1、取材就不说了
2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯（1:1）脱水的，也有用梯度酒精逐步脱水的
4、干燥。有冷冻干燥的，也有用乙腈干燥的。
5、导电处理。也不说了。

我当时看的就是生物材料上的细胞，1、取材没什么麻烦，要是看细胞组织，可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的（有些文献说2h就OK~，你可以尝试下看看）。3、脱水用的是25%，50%，75%，95%，100%的酒精一次浸泡15min（不放心的可以降低酒精梯度~~，多泡几次）。4、干燥采用的是冷冻干燥。  以上方法仅供参考哈，你也可以查查相关文献。

2.5%的戊二醛需要用超纯水配吗？不同浓度的酒精是不是也要用超纯水来配？可以不用锇酸二次固定吗？

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

生物膜也是和细胞差不多，能说一下具体的做法吗？

主要看你样品了，一般按照以下程序进行：取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

1、取材就不说了
2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯（1:1）脱水的，也有用梯度酒精逐步脱水的
4、干燥。有冷冻干燥的，也有用乙腈干燥的。
5、导电处理。也不说了。

我当时看的就是生物材料上的细胞，1、取材没什么麻烦，要是看细胞组织，可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的（有些文献说2h就OK~，你可以尝试下看看）。3、脱水用的是25%，50%，75%，95%，100%的酒精一次浸泡15min（不放心的可以降低酒精梯度~~，多泡几次）。4、干燥采用的是冷冻干燥。  以上方法仅供参考哈，你也可以查查相关文献。

2.5%的戊二醛需要用超纯水配吗？不同浓度的酒精是不是也要用超纯水来配？可以不用锇酸二次固定吗？

恩，都用的纯水，我当时就是用戊二醛的，没用锇酸了，锇酸对磷脂固定效果较好

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:
主要看你样品了，一般按照以下程序进行：取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

1、取材就不说了
2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯（1:1）脱水的，也有用梯度酒精逐步脱水的
4、干燥。有冷冻干燥的，也有用乙腈干燥的。
5、导电处理。也不说了。

我当时看的就是生物材料上的细胞，1、取材没什么麻烦，要是看细胞组织，可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的（有些文献说2h就OK~，你可以尝试下看看）。3、脱水用的是25%，50%，75%，95%，100%的酒精一次浸泡15min（不放心的可以降低酒精梯度~~，多泡几次）。4、干燥采用的是冷冻干燥。  以上方法仅供参考哈，你也可以查查相关文献。

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

原文由 hongying1990(hongying1990) 发表:
跪求高人指点，扫描电镜的预处理方法。主要做的是关于生物膜的
不甚感激

生物膜？能具体点么，我之前看过细胞，就是拿戊二醛固定，然后酒精梯度脱水后看的

生物膜也是和细胞差不多，能说一下具体的做法吗？

主要看你样品了，一般按照以下程序进行：取材、固定、脱水、干燥、有些导电性可能会有样品导电处理。

1、取材就不说了
2、固定。一般选用戊二醛、锇酸、等
3、脱水。有用丙酮/醋酸异戊酯（1:1）脱水的，也有用梯度酒精逐步脱水的
4、干燥。有冷冻干燥的，也有用乙腈干燥的。
5、导电处理。也不说了。

我当时看的就是生物材料上的细胞，1、取材没什么麻烦，要是看细胞组织，可能麻烦点。2、固定用的是2.5%戊二醛固定过夜的（有些文献说2h就OK~，你可以尝试下看看）。3、脱水用的是25%，50%，75%，95%，100%的酒精一次浸泡15min（不放心的可以降低酒精梯度~~，多泡几次）。4、干燥采用的是冷冻干燥。  以上方法仅供参考哈，你也可以查查相关文献。

原文由 冬季(lylsg555) 发表:

原文由 zhadaoan(zhadaoan) 发表:

我想了解下冷冻干燥的程序是怎么样的

我们当时就是普通的冷冻干燥，将样品放入冰箱冷冻室，待冷冻后放入冷冻干燥箱（零下-60℃左右吧），然后抽真空冷冻，我记得真空稳定时大概几Pa吧，这是比较粗的流程了。