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主题：【分享】微生物限度、无菌检查及方法学验证问答集结帖【2】

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发表于：2012/04/17 10:57:19 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问：煮沸消毒法中为何加碳酸钠或石碳酸效果更佳?

答：加碳酸钠或碳酸氢钠的目的为提高水的沸点，可以提到到105摄氏度，还可以去污去锈；详细请查阅物理化学或化学手册

石炭酸又名来苏尔，本身就是化学消毒剂，可以加强消毒效果

关键词：煮沸消毒法 碳酸钠或石碳酸





问:对微生物检品取样工具有什么要求？

答:微生物检品取样工具，1、一次性耗材

2、能够反复使用的耐高温、高压、不易与药品产生反应。

关键词: 取样工具 要求





问：黑曲霉的传代是否和其它菌一样?我之前接好的第二代黑曲霉是白白的,呈棉絮状,用普通方法是否能够传代?请问斜面如何保持干燥？

答:黑曲霉就是这样的,前7天生长的白色物质是菌丝体,后期培养基中的营养用完了才会产生黑色的孢子～这是正常的生长状态,注意传代时的改良马丁斜面培养基要保持干燥,水分过多的话孢子颜色会偏黄.把培养基放在35℃的恒温培养箱里培养1天，应该可以去掉水分的。

关键词：黑曲霉 传代 干燥





我也没怎么来过 帮大家整理几个吧：

问：薄膜过滤法做限度验证，药典中说冲洗量过大有可能会造成微生物的损伤，是说的供试品中的微生物吗？一般冲洗量在什么范围内算是适当呢？ 还有冲洗量过大会损伤薄膜而影响到最后所加菌的充分截留吗？

答：一般冲洗体积每张膜不应大于1000ml。根据我们的实验经验，实际上一种冲洗液达到500ml/膜时就已经达到冲洗极限，也就是说到500ml冲洗时还不能有效去除抑菌活性，再通过增加冲洗体积一般也无济于事，这时应考虑改变冲洗条件，比如增加冲洗液温度（45度）、添加表面活性剂（0.1％土温80等）；再不奏效，就得考虑添加中和剂。上述经验也可能与所使用的实验器材（主要是膜材质）有关。

关键词：薄膜过滤法 冲洗量





问：低速离心辅料不容易离干净，还有其它方法吗？大部分需离心的片剂都不容易离干净，如罗红霉素片。

答：供试液低速离心只能解决沉降系数比较大的固体颗粒干扰，对于一些新型辅料，比如微晶纤维素等是难以奏效的。目前可尝试采用如下方法：取供试液上清液（静置、或低速离心）适量，转移到一中试管，从管口推入一小团疏松的无菌棉花，一直到液面以下，用移液管在棉花上部取液实验。

关键词：离心 敷料干扰





问：开放式薄膜过滤器,滤膜应该采用什么方法灭菌

答：1，湿热灭菌法 适合少量 且膜尺寸会有缩小 2，钴60辐射灭菌,一张膜用一个塑料袋包好,一次去灭菌500到1000张膜,效果很好 3，购买成品已灭菌膜

关键词：滤膜灭菌





问：生化、霉菌、恒温培养箱怎么区分和选择？

答：1.生化培养箱主要用于生化反应的孵化,所以它们的门主要由玻璃组成,用于在特定温度孵化反应,操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化;亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养. 2.霉菌培养箱与生化培养箱大体相同,其区别在于多了一个灭菌开关,用于杀灭霉菌的孢子 3.恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌,正如其名,其密封性好,温度和湿度都是可控恒定的,但不便于在外观察; 总之,三种培养箱各有所长,使用者可根据自己的具体需要选择

关键词：培养箱的选择





问:为什么验证时试验组中菌液和供试液在加培养基之前尽量避免混合?

答:验证是考察供试品经所用方法处理后对微生物抑制能力的消除程度,所以在注皿前一定保证微生物是处于成活的状态, 真实地反应微生物在有营养成分的良好培养条件下(我们人体便是一个很好的培养环境)与供试品作用的结果.否则,便失去了我们验证的意义.故验证的过程中,试验组中菌液和供试液在加培养基之前尽量避免混合,然后尽快倾注培养基.

关键词:混合





问:2005版中国药典及各国药典对于回收率如何规定?

答:关于回收的限率问题,各国药典规定不同.;EP、BP、JP: 各试验菌的回收率均不低于80% ;2005版中国药典及USP：各试验菌的回收率（包括供试品组和稀释剂对照组）均不低于70%.各国设定下限都只是根据各国的实际情况和统计数据对方法所制定的一个门槛,旨在考察供试品经所用方法处理后对微生物抑制能力的消除程度.对于它的上限,根据药典委员会的专家推荐,以不超出120%为限.

答:回收率
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2012/4/17 10:59:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问：常用菌种及培养基英文对照

答：Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌

Bacillus pumilus 短小芽胞杆菌

Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌

Micrococcus luteus藤黄微球菌

Escherichia coli 大肠埃希杆菌

Saccharomyces cerevisiae啤酒酵母菌

Candida albicans 白色念珠菌

Aspergillus niger黑曲霉

Salmonella paratyphi B 乙型副伤寒沙门(氏)菌

Pseudomonas aeruginosa铜绿假单胞菌

Coliform 大肠菌群

Clostridium 梭菌

Nutrient agar 营养琼脂培养基

Rose Bengal agar Sodium 玫瑰红钠琼脂培养基

Nutrient broth medium营养肉汤培养基

Thioglycollate medium 硫乙醇酸盐流体培养基

Martin medium modified 改良马丁培养基

Bile salt lactose enrichment 胆盐乳糖培养基

0.1％ peptone water medium 0.1% 蛋白胨水

pH 7.0 sodium chloride peptone buffer pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液

Lactose bile salt fermentation medium 乳糖胆盐发酵培养基

DHL（deoxycholate H2S lactose agar）agar medium 胆盐硫乳琼脂培养基

Tetrathionate enrichment base medium 四硫磺酸钠亮绿基础培养基

Eosia methylene blue agar medium曙红亚甲蓝琼脂培养基 关键词：菌种 培养基 英文对照





问:该如何理解“常用供试液制备方法：

1、液体供试品——取供试品10ml，加pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试品液。......（请问，这里加pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液是90ml还是90ml以上，大概估计到100ml？2000年版说的很明白90ml稀释液）

2、固体供试品——取供试品10g，加pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml，......（请问，这里又该加pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液是90ml，或者90多ml，或者100ml？2000版为100ml稀释液）

[按照2005年版，在制备供试液时该如何加入稀释液（pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液）]

答:

2005年版药典二部附录：“常用供试液制备方法：液体供试品、固体供试品——取供试品10ml，加pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试品液。

“加至”应理解为“稀释液”与“供试品”的总量为100ml。作为固体供试品，称取2005版药典规定g数，置灭菌量筒中，加入pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml，再移至其它匀浆容器，混匀！

对于液体样品，可以这样操作：取100ML灭菌量筒加入10ML样品，加稀释剂至100ML刻度！

关键词:供试液制备





问:黑曲霉传代和保藏的方法

答:(1)黑曲霉孢子悬液，冰箱4-8℃进行保藏,保藏时间为1个月;

(2)改良马丁琼脂斜面低温保存法，保存2～3个月

关键词:黑曲霉 传代 保藏







问:无菌用培养基的无菌检查和灵敏度检查隔多长时间再复测？

答:认为无菌检查用培养基的无菌性检查，应该每配制一次就做一回（因为培养的时间为14天，可以随样品的无菌检查同时进行），这样做即便是有样品染菌，在你分析原因时也可以少排除一项。至于培养基的灵敏度检查，培养基换批号或厂家，要做灵敏度实验;在批号不换的情况下，本人认为如果同一批号使用半年以上，应该再作一次灵敏度检查，如果发现培养基的味、外观性状有所改变，应该及时作灵敏度检查。总之，应处处小心，才能步步为赢。

关键词: 培养基 无菌 灵敏度





问:玻璃器皿用湿热灭菌121℃灭菌多长时间？

答:玻璃器皿用湿热灭菌121℃灭菌30min。

关键词:玻璃器皿 湿热灭菌
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2012/4/17 10:59:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问:常用的消毒剂有哪些?

答:5～20倍稀释的碘伏水溶液

0.1%新洁尔灭溶液

1:50的84消毒液

75%乙醇溶液

3%碘酒溶液

5%碳酸(来苏儿)消毒溶液

2%戊二醛水溶液

尼泊金乙醇消毒液(具体配置不详)

关键词:消毒剂





问:适宜药厂检验室,菌种的保藏方法?

答:大肠/金黄色葡萄球菌/沙门 低温斜面保藏,2～8℃,1～2个月;

绿脓 常温斜面保藏 ,1～2个月;

枯草 低温斜面保藏,2～8℃,3～6个月;

生孢 硫乙醇酸盐流体培养基低温保藏,2～8℃,2～3个月;

白色念珠 低温斜面保藏,2～8℃,3～6个月;

黑曲霉 低温斜面保藏,2～8℃2～3个月;(有误请发论坛消息给我指正,这是我目前用的方法,谢)

关键词:菌种保藏





问:如何使验证实验在制备供试液后1小时做完?

答:小窍门:统筹安排验证试验,把时间合理化.

举例常规法--------1制备菌液放到中午临近下班时来完成.2下午一上班就开始验证试验前期工作,进行供试液的制备3按预先安排进行验证4完成验证试验后,进行规定的培养.

很多人把菌液稀释拿到和制备供试液一起来做,1小时肯定要超.

关键词:验证





问:常用的灭菌参数?

答:湿热灭菌121℃15min(灭菌培养基等);

湿热灭菌121℃30min(灭菌不宜干烤的玻璃器皿常用)

干烤灭菌160～180℃2小时

干烤灭菌250℃至少1小时(除外源内毒素用)

关键词:灭菌参数





问:培养基如何调PH?

答:

一般培养基的PH值规定范围都精确到小数点后一位，比如说PH7.0的氯化钠－蛋白胨水要求为7.1±0.1，PH试纸是不能满足此精确度的，只能用PH计调；

由于灭菌后调PH要想保持无菌，调节PH值所用滴管、溶液乃至PH的电极必须也要灭菌，其中某些条件显然是无法到达的，所以只能灭菌前调PH ；

由于大部分培养基中某些成分（比如说牛肉、蛋白胨等）经高温灭菌后会产酸导致PH变低，故培养基在配制完毕后调节PH值（调高0.2）再灭菌。

控制培养基的PH值目的是使微生物能够良好生长的，而培养（23℃～28℃，30℃～35℃）的温度在室温左右，所以应该在室温（10～30℃）条件下调PH.

关键词:培养基PH



问:TTC的作用?

答:

TTC是氯化四唑，即2，3，5－三苯基氯化四唑，它的无色溶液可以做指示剂，可以显示活细胞中所发生的还原过程。再活细胞中，2，3，5－三苯基氯化四唑经氢化作用，生成一种红色稳定的不扩散物质三苯基甲月替，可以帮助我们识别菌落

关键词:TTC



问:纯化水的验证与检查

答: GMP有规定:纯化水系统安装之后需要验证其管道消毒效果的验证,验证期间:最远处管口需每日验证,持续一年

其他各管口需一周全部验证一遍,持续3周

验证完毕,每周需检查, 而每管口需一月轮一次

关键词: 纯化水 验证与检查



问:每一个药的无菌检查验证是否也要像限度验证那样重复做3次呢？

答:一次就可以了，不过记得要做培养基的灵敏度检查和同时做无菌性检查哦 注意：不同品种的药品（不包括厂家、批次不同），无菌检查验证、微生物限度限度验证一定要重复做3次！

关键词:无菌检查验证次数
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