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主题：【分享】草根能力对比--富硒酵母中总硒含量测定过程

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hbchendl
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2012/5/11 21:48:11 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
出状况啦！加完荧光剂的试液居然出颜色 啦，正常的应该是无色透明液体。


加热20分钟后颜色更深啦。右边二个试管是加标准样的试样，很正常。

试样出来颜色，一种可能是样品里含有能产生颜色的有机杂质，这种可能性几乎为零，另一种可能性是样品中的硒元素浓度特别大。产生的荧光极其强烈。
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hbchendl
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2012/5/11 22:03:59 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
下一步是待样品冷却后，加入2.0ml环已烷，振荡萃取荧光物到有机相里。
加入环已烷后，盖上塞子，用拇指按住塞子，上下剧烈摇晃一分钟。我一只手可以同时拿四个试管，两只手一次是八只试管，摇120下也差不多是一分钟。这里看到塞子的重要性了，如果不严实，就会漏水了。所以塞子与试管必须是原配的！

果然，萃取后有色物全跑到上层有机相里了。

消化时产生的渣滓会沉积在有机相与无机相的界面处，对测定无影响。


使用的全部试剂来个全家福吧。最显眼的是那瓶娃哈哈纯净水吧？正是它。这水是真干净，啥元素也测不出来！咱们算笔帐：买一套超纯水装置需要十来万元。这一瓶六百毫升的纯净水只需要1.5元。十万元买批发价的纯净水怎么的也能买上十万瓶吧？其实还是这个划算。而且瓶子用来装试剂是绝对的干净！我用它来装元素标准液及储备液，还有低浓度的稀释样品的硝酸盐酸。
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hbchendl
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2012/5/11 22:14:16 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最后一步就是上机测试荧光强度啦。
我用的是日立650-60荧光分光光度计。真巧，前两天在荧光版面上看到有人也用它。这可是1985年的老古董啦！质量刚刚的。十年左右需要换一只氙灯。从没坏过！
从图片还能看到测量时使用的激发光波长为379nm，发射光波长是520nm。


荧光分光光度计使用时与普通的分光光度计很类似，也是把样品倒入一个比色皿里测量荧光强度。通常需要样品的量为1ml。
现在许多实验的荧光试剂相当的贵，所以样品量是越小越好。正好我这台有个与液相色谱联用的微量检测池。我把它改装成了一个可以检测0.1ml样品的普通检测池。


现在许多实验的荧光试剂相当的贵，所以样品量是越小越好。正好我这台有个与液相色谱联用的微量检测池。我把它改装成了一个可以检测0.1ml样品的普通检测池。只需要用加样器抽0.1ml试液从上面的螺丝口顶着打进去就行啦。测量后再对着打一针空气进去，把样吹出来，就可以测量下一个样品。当然也可以打一管水进去冲洗一下。吹出来的液体会从边上的细管流出来，下面放个平皿接着点。
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2012/5/11 22:16:43 Last edit by hbchendl
hbchendl
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2012/5/11 22:30:52 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
然后嘛，不过是测量各试样及标准样的荧光强度，用标准曲线法计算浓度。
刚才说过，正常的样品是无色的，在荧光分光光度计里才能照出荧光来。这批样品真坑爹！它们的荧光强度太大啦，大得超出了我的想象！我把有机相稀释了两个40倍，它的荧光强度仍然超过普通的生物样品的荧光强度！超出了我的标准曲线样品的上限。因为样品浓度太大，我无法定量啦！这次测定失败！
只好下周重新测定啦。好在知道了样品浓度的数量级，在前期多稀释一下就行了。
一般的生物样品，硒元素浓度在0.1ug/ml数量级水平。植物的硒含量普遍高一些，也就是几个微克每毫升的水平。现在这个样品的浓度至少高出了上千倍。
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zsq326
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2012/5/12 8:20:57 15楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从楼主的测试过程计算，与我们的ICP测试结果差不多，我用了几种消解方法，到，后面采用不同试剂进行湿法消解，但由于时间问题，下午就反应了半小时，但结果相差不大，少了2种试剂，看下周能采购回不，准备用UV进行比对下。
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djtuwyr
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2012/5/12 11:06:38 16楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
支持一下！！
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happy水中月
lianlxh
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2012/5/12 20:29:32 17楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zsq326(zsq326) 发表:
从楼主的测试过程计算，与我们的ICP测试结果差不多，我用了几种消解方法，到，后面采用不同试剂进行湿法消解，但由于时间问题，下午就反应了半小时，但结果相差不大，少了2种试剂，看下周能采购回不，准备用UV进行比对下。


希望您和楼主一样做个分析过程的总结和大家分享下你实验过程中的种种情况，有奖励的哦
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zsq326
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2012/5/12 21:32:29 18楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
星期一吧，有更详细的数据出来
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下里巴人
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2012/5/15 11:00:02 19楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zsq326(zsq326) 发表:
星期一吧，有更详细的数据出来


结果出来了吗？分享一下过程撒！
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zsq326
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2012/5/15 12:53:01 20楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
过程有分享啊，在论坛上，结果待统计
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