主题：【资料】－劳动节大礼包：欧盟农药残留标准！！！！

杀虫剂农药多残留气相色谱检测法
本欧盟标准由CEN在1998年9月7日批准。
CEN成员要求遵守CEN/CENELEC国际规则，在变更之前，这些规则能够提供欧盟标准和国家标准具有同等地位的条件。
直到现在，在CEN成员中，这些和国家标准相关的条款和著作参考还在应用。
欧盟标准有3个官方版本（英语、法语和德语）。在CEN成员监督下，任何一种翻译成自己母语的译本和官方版本具有同等地位。
CEN成员是奥地利、比利时、捷克、丹麦、芬兰、法国、德国、希腊、冰岛、爱尔兰、意大利、卢森堡、荷兰、挪威、葡萄牙、西班牙、瑞典、瑞士、阿拉伯联合酋长国等国家标准的主体。

前言
这个欧盟标准由技术委员会CEN/TC275制定。
直到最近1999年4月，相冲突的国家标准被撤消后，本欧盟标准在同一出版物或认可等方面，才被给予了与国家标准同等地位。
本欧盟标准EN 12393由3部分组成。
第一部分：总纲，其试剂、仪器设备和气相色谱图等等适用于所有被选择的检测方法。
第二部分：提取和净化，提供了从方法L到P的提取和净化中液—液分离、吸附色谱柱、凝胶渗透色谱柱等技术。
第三部分：测定和确认测试，提供了农药定性和定量测试及结果确认等技术。
根据CEN/CENELEC国际规则，下列国家的国家标准体系要求执行欧盟标准：奥地利、比利时、捷克、丹麦、芬兰、法国、德国、希腊、冰岛、爱尔兰、意大利、卢森堡、荷兰、挪威、葡萄牙、西班牙、瑞典、瑞士、阿拉伯联合酋长国。
介绍
本欧盟标准由一系列农药残留检测方法组成。由于这些方法在这个领域不断被改进，因而没有一个方法被证明是主要方法。本标准中所选方法已经被确认或在欧洲广泛应用。
在不同的检测体系如食品和杀虫剂中，这些方法都得到了广泛应用，因此当仪器设备、提取、净化和色谱条件得到改善后，就有可能提高方法的性能。
1 范围
本欧盟标准适用于非脂肪食品中杀虫剂农药多残留定量检测样品的提取和净化。
为了这个目的，使用了不同的溶剂。首先用在分析中有干扰的萃取剂将所有杀虫剂农药残留提取出来，然后用几个技术纯化粗提取物后，用于分析。
这个标准包含下列这些提取和净化方法，这些方法已经被多个实验研究证实或在欧洲广泛被采用。
方法L：用丙酮提取，二氯甲烷液液分离，在硅胶土或碳柱上净化。
方法M：用丙酮提取，二氯甲烷/轻石油液液分离，如有必要，在弗罗硅藻土柱上净化。
方法N：用丙酮提取，二氯甲烷液液分离，凝胶渗透和硅胶土层析柱上净化。
方法O：用乙腈提取，轻石油液液分离，在弗罗硅藻土柱上净化。
方法P：有机磷化合物用乙酸乙酯提取，如有必要，凝胶渗透净化。
本欧盟标准对方法L—P中非脂肪食品样品的提取和净化有详细的描叙。在提取中用到了不同体积的多种溶剂。净化列举了液液分离、在不同吸附剂中液相层析及凝胶渗透层析等技术。
一张表提供了每个方法适用于不同杀虫剂的检测研究。
2 标准参考
本欧盟标准参考的标准或从其他出版物中供应的分有日期或无日期，这些标准参考在本文适当的地方被引用，出版物列举在后面。对于有日期的参考，这些出版物以后的改正或修订均不适用与本标准，除非本标准改正或修订。对于无日期的参考，它以后的修改均适用于本标准。
EN 12393-1： 1998  非脂肪食品中杀虫剂农药多残留气相色谱法—第一部分：总纲
EN 12393-3： 1998  非脂肪食品中杀虫剂农药多残留气相色谱法—第三部分：检测与验证
3 原理
象介绍中描述一样，当仪器设备、提取、净化和色谱条件变化时就有可能提高方法的性能。这些变化将在文献中和给出有效结果中得到证明。
用适当的溶剂将样品中的杀虫剂农药残留提取出来，如此得到最大杀虫剂农药残留和最小干扰物质的提取。任何有干扰的物质都将从样品中除去，从而得到一种溶剂中的杀虫剂农药残留溶液，用选择的方法进行定量检测。
4 总纲：步骤概要

4.1提取
提取步骤见表1。
表1
方法    样品质量（g）    溶剂体积(ml)    比例（质量/体积）
L    100    丙酮：200    1/2
M    100    丙酮：200    1/2
N    1001)    丙酮：200    1/2
O    100    丙酮：200    1/22）
P    50    乙酸乙酯：100    1/2
1）    若基质中的水含量超过70%是相关的。2）    依赖基质中的水含量。
4.2净化
4.2.1液液分离
液液分离步骤见表2。
表2
方法    提取的试样量（AE）    加水的体积（VW）    溶剂的体积（VS）    比例AE/VW
L    50ml    250ml    50ml    1/5
M    80ml    0ml    200ml    -1)
N    200ml    Xml1)    100 ml    -1)
O    250ml    600ml    100 ml    1/3
1) 依赖基质中的水含量。
建议有二种液液分离技巧
——加水（方法L、N、O）
——不加水（方法M）
4.2.2吸附柱层析
方法L、M、N、O用不同的吸附：硅胶土、碳、弗罗硅藻土等用于净化或者混合。
4.2.3用Biobeads S-X3的凝胶渗透。
5方法L：用丙酮提取，用二氯甲烷液液分离，在硅胶土/碳柱上净化。
5.1原理
在丙酮中将样品均质化，匀浆过滤。取滤液试用量用水稀释，二氯甲烷提取。浓缩有机相，在硅胶土和活性炭柱上层析。用二氯甲烷、甲苯和丙酮的混合液淋洗杀虫剂农药残留，淋洗液浓缩用于气谱分析。
5.2溶剂
按照EN12393：1998第4条款，所有试剂均适合于杀虫剂农药残留分析。
5.2.1丙酮
5.2.2二氯甲烷
5.2.3n-己烷
5.2.4甲苯
5.2.5淋洗混合液：二氯甲烷/甲苯/丙酮 5/1/1（V/V/V）。
5.2.6氯化钠溶液：标准物质
5.2.7硫酸钠：在500°C加热至少4h，冷却贮藏于干燥器中。
5.2.8活性炭
5.2.9硅胶土60：用于层析，63um—200um（70目至230目）。
5.2.10Celite545（供选择）。
5.3仪器设备
按照EN12393：1998，实验室常用仪器，如下详述：
5.3.1高速搅拌机或匀浆机：有合适的匀浆杯。
5.3.2溶剂蒸发器：带有水浴锅，在40°C能恒温。
5.3.3层析柱：带有玻璃盘和聚四氟乙烯活塞，内直径25mm，长400mm。
5.4步骤
5.4.1样品的予处理
将样品剁细，混合均匀。

5.4.2提取
称100g粉碎样，放于1L的烧杯中，加200mL丙酮，匀浆30s，如有必要可加入助滤剂Celite545。用50mL丙酮洗涤搅拌机，保存洗液以后用来洗涤烧杯和布氏漏斗。在铺有滤纸的布氏漏斗中减压过滤，用上面洗涤保存液一部分冲洗滤纸。
充分振荡滤液并测量体积，量取1/5体积的滤液于1L的分液漏斗中，加250mL水，25mL氯化钠溶液和50mL二氯甲烷后，使劲振荡至少2min，如果振荡不充分，则有可能不能充分分离，用50mL二氯甲烷重复提取，将二氯甲烷有机相合在一起，加30g硫酸钠干燥30min，通过滤纸过滤干燥液，用30mL二氯甲烷分3次冲洗烧杯和滤纸，将滤液蒸干至约2mL，最后通过手动涡流移走最后一点溶剂，用10mL二氯甲烷溶解。
5.4.3柱制备
用二氯甲烷填层析柱至1cm，然后快速注入溶于15mL淋洗混合液的5g硅胶土，沥干，再将15g硅胶土和1g活性炭在50mL烧杯中混匀，慢慢加入35mL淋洗混合液（防热），不要加超过35mL淋洗混合液，否则悬浮液易分层，导致柱效低。
通过漏斗，加活性炭和硅胶土的混合液在层析柱硅胶土上面，先慢慢加，然后快速加，同时不断摇动，并打开活塞。用通过柱的淋洗液冲洗烧杯，使淋洗混合液保持在填充物上2cm，在柱上加入5g硫酸钠，再用50mL淋洗混合液冲洗柱。
5.4.4净化
定量转移5.4.2的二氯甲烷溶液到层析柱中,用5mL二氯甲烷洗涤转移液，收集净化液于250mL圆底烧瓶中，用140mL淋洗混合液冲洗柱，蒸发净化液至30mL，再转移到50mL圆底烧瓶中，继续蒸发至约2 mL，预先清空旋转蒸发仪的接收器，使旋转蒸发仪充分干燥，转移溶液到试管，用n-己烷稀释至5.0mL。
5.5气相色谱
用适合于测定有机氯、有机磷和有机氮杀虫剂农药残留的气相色谱系统。
5.6相关研究
5.7应用
6方法M：用丙酮提取，二氯甲烷/轻质石油液液分离，如有必要，在弗罗硅藻土柱净化。
6.1原理
样品在丙酮中均质化并过滤，滤液中的一部分用轻质石油和二氯甲烷的混合液提取，然后再用二氯甲烷提取，用适当的检测器，有机相就能直接注入气相色谱或在弗罗硅藻土柱上净化，这淋洗液浓缩用于气相色谱测定。
6.2试剂
按照EN12393：1998第4条款，所有试剂均适合于杀虫剂农药残留分析。
6.2.1丙酮
6.2.2轻质石油：沸点在40~60°C。
6.2.3氯化钠：在500°C加热至少4h，冷却贮藏于干燥器中。
6.2.4二氯甲烷
6.2.5乙腈
6.2.6硫酸钠：在500°C加热至少4h，冷却贮藏于干燥器中。
6.2.7弗罗硅藻土：150um~250um（60目到100目）
激活：在130°C~135°C干燥至少5h，在干燥器中冷却，放置于密封罐中保存；这样处理能保持活性4天。能用同样的方法重复激活。吸附剂的活性应当用杀虫剂标准物质象方法中描述的那样进行检测。
6.2.8二乙醚：容许2%（V/V）的乙醇。
6.2.9淋洗液A：二乙醚/轻质石油6/94（V/V）。
6.2.10淋洗液B：二乙醚/轻质石油15/85（V/V）。
6.2.11淋洗液C：二乙醚/轻质石油50/50（V/V）。
6.2.12淋洗液D：二氯甲烷/轻质石油20/80（V/V）。
6.2.13淋洗液E：二氯甲烷/轻质石油/丙酮50/49.65/0.35（V/V/V）。
6.2.14淋洗液F：二氯甲烷/轻质石油/丙酮50/48.5/1.5（V/V/V）。
6.3仪器设备
按照EN12393：1998，实验室常用仪器，如下详述：
6.3.1高速搅拌机或匀浆机：有合适的匀浆杯。
6.3.2层析柱：带有玻璃盘和聚四氟乙烯活塞，内直径22mm，长300mm。
6.3.3溶剂蒸发器
6.4步骤
6.4.1样品的准备
剁碎样品，混匀，如果样品中水的含量不足30%，加水至80%左右。
6.4.2提取和分离
称100粉碎样，放于搅拌杯中，加200mL丙酮，高速匀浆3min，转移到布氏漏斗中，其中滤纸用丙酮打湿，减压抽滤，测定滤液体积。
量取80mL滤液于1L的分液漏斗中，加100mL二氯甲烷，100mL轻质石油，振荡3min，静置分层。转移下层水相至另一1L的分液漏斗中，通过铺有3cm厚的硫酸钠的漏斗干燥上层有机相，收集于一圆底烧瓶中。
加7g氯化钠至水相，摇动30s，直至氯化钠完全溶解。再加100100mL二氯甲烷，振荡3min，分层。转移下层水相至另一1L的分液漏斗中，通过同样的硫酸钠干燥有机相。再加100mL二氯甲烷于第三个分液漏斗中，振荡3min，分层，弃去水层，同样的方法干燥有机相。最后用50mL二氯甲烷洗涤硫酸钠层，浓缩所有有机相至2mL，加100mL轻质石油再次浓缩至2mL，重复直至除去所有的二氯甲烷，加20mL丙酮，再次浓缩至2mL，这个浓缩液可以直接用于配有HECD、NPD、FPD（方法M）的气相色谱。
在某些情况下，对于ECD检测需要净化：方法M1 或M2。如要净化，样品提取液浓缩至1mL丙酮（不是2mL），用10mL轻质石油稀释。
6.4.3净化

6.4.3.1方法M1
放一团棉线于层析柱底端，填充20cm高的轻质石油，注入20g弗罗硅藻土，轻轻敲打，直至吸附剂固定，在加入1~2cm厚的硫酸钠层，用30mL轻质石油淋洗吸附剂。放一个蒸发烧杯在柱下面收集淋洗液。象6.4.2描述净化那样将提取液转移到柱中，以小于5mL/min的流速通过，用5mL轻质石油2次洗涤瓶并转移到柱中，再用少量的轻质石油淋洗层析柱壁，以5mL/min的流速，淋洗200 mL淋洗液A。
用200 mL淋洗液B再次淋洗，收集于另一收集器中。最后用200 mL淋洗液C淋洗。浓缩每个淋洗液到适当体积，进行气谱分析。
6.4.3.2方法M2
放一团棉线于层析柱底端，填充20cm高的轻质石油，注入20g弗罗硅藻土，轻轻敲打，直至吸附剂固定，在加入1~2cm厚的硫酸钠层，用30mL轻质石油淋洗吸附剂。放一个蒸发烧杯在柱下面收集淋洗液。象6.4.2描述净化那样将提取液转移到柱中，以小于5mL/min的流速通过，用5mL轻质石油2次洗涤瓶并转移到柱中，再用少量的轻质石油淋洗层析柱壁，以5mL/min的流速，淋洗200 mL淋洗液D。
用200 mL淋洗液E再次淋洗，收集于另一收集器中。最后用200 mL淋洗液F淋洗。浓缩每个淋洗液到适当体积，进行气谱分析。
6.5气谱和计算
选择适合于测定有机氯、有机磷、有机氮杀虫剂农药残留的气谱系统。
7方法N：用丙酮提取，二氯甲烷液液分离，用凝胶渗透和硅胶土层析进行净化。
7.1原理
样品剁碎，根据样品中的含水量，加水保证丙酮/水=2/1（V/V），均质化。匀浆过滤。滤液中一部分加氯化钠饱和，加二氯甲烷稀释，使分离除去水。
有机相浓缩，在凝胶渗透色谱法

好几十页。标准共3部分，提要、样品提取和纯化、测定条件。