真菌毒素的检测:(黄曲霉毒素)
黄曲霉毒素,alfatoxin,B1,B2,G1,G2,M1 ,其中B1的毒性是最毒,而且含量是最多的,M1是牛吃了含有黄曲霉毒素的饲料后在其体内代谢而成的,一般就在乳品中检测,其产生机理和物理,化学性质就不多说了,直接说方法:
1)TLC薄层色谱法,或薄层层析法Thin Layer Chromatography,其流程与经典薄层法相同,就不缀述了,最后定量是利用黄曲霉毒素在紫外灯下发荧光来定量,过去都是利用肉眼与标准样品比较来判读的,不知现在的薄层扫描仪是否能做到用仪器判读。该方法的特点是慢(操作繁琐),对检验人员副作用大(要接触标准样品以及有毒的有机溶剂),不准确(用肉眼判读,每个人可能判读的不一样,也有可能同一个人对同一个样品两次不同判读也有差别),不过很便宜。
2)ELISA方法,与经典ELISA方法相同,无非就是竞争性抑止,最后用酶标仪读取吸光度值判读,其特点是快速(相对简单),对检验人员毒副作用相对较小(也会接触标准样品),特异性(利用抗体抗原反应),价格适中(尤其是做大量样品的时候,不会重复做标准曲线,一块板子只需做一次标准曲线),不过该方法也有缺点,比如你的样品量较少,对于96孔板,你需要拆其中1条或2条来做,有几个孔需要用来做曲线,其他的用来做样品,下次再有样品的时候,你还学要再做曲线,这样就会重复浪费孔数而增加成本,而且板子在使用前都是真空包装,未用完的需要冷藏保存,再用时要再回到室温,如果反复几次也会有影响,再就是生物制品都会有批此间有差异的问题,尤其国产的。
3)HPLC方法,我觉得HPLC应该有三种,一种时IAC(Immunoaffinity Column,免疫亲和柱)做净化,一种是SPE作净化,第三种就是用其他萃取方法做净化,比如液夜萃取,我没有接触过,就不说了,先说IAC作净化,柱子填充有黄曲霉毒素的抗体凝胶,特异性强,快速,简单,但是价格昂贵,SPE柱作净化,特异性没有IAC强,但也比较快速,简单,价格也会低点,仪器这块,单不说HPLC其他配置,先说需要有荧光检测器,紫外检测器虽然也可以检测,但已经无法满足要求了,要有柱后衍生系统,所以这个一般单位难度就大点,而且HPLC也需要有标阳来定性,对检验人员也有潜在的危险性。
4)IAC+荧光计的方法,这个荧光计是专门的荧光计,可以直接得出黄曲霉毒素的浓度,无需做曲线,仪器标定也很简单,无需标样,所以价格也是不菲啊。