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主题：【原创】【极限体验】β-胡萝卜素的完美解决方案！

浏览0 回复53 电梯直达
fengmo4668
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发表于：2012/05/27 22:49:45 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被luxw设置为精华；
前言：关于β-胡萝卜素的研究，前前后后，延宕了很有一段时间了。最终在月旭色谱柱的帮助下，得到了圆满的解决方案！欣喜啊！

色谱条件： 色谱柱    Ultimate® Polar-RP

            流动相    甲醇-乙腈（90:10）

                        流速        2ml/min

                        进样量    10μL

                      检测波长 448nm

过程叙述：
刚开始，是准备和维生素A一块研究，也就是在一个液相色谱条件下把维生素A和β-胡萝卜素一针做出来，设计的出发点是两者都是补充维生素A的营养成分，放到一起有利于计算维生素A的总量，而且都是油溶性的维生素。

往往，理想是美好的，现实是残酷的！

用做维生素A的方法，没有办法实现β-胡萝卜素的分离。

以前关注过我的版友，应该还记得吧，我维生素A的色谱条件是为了分离顺、反式维生素A，所以用的是正相硅胶色谱柱。而β-胡萝卜素在正相柱上没有保留，基本上是和溶剂峰一块出来的。（图1）

图1. 正相色谱柱上β-胡萝卜素的分离情况

所以，这个设想只能放弃！

没有办法，只能和维生素A分开来研究。

按照国标中GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定中的色谱条件，对β-胡萝卜素进行了尝试分离，用的是国内另一个厂家的反相C18分离柱（分析原始记录见图2，结果见图,3和图4）。

图2.  当时的原始记录

图3.  V=2ml/min

图4.  V= 3ml/min

如果你注意到了流速和保留时间的对应关系，可能会和我一样有绝望的心情。

而且，别的任务也赶的非常紧，只能把β-胡萝卜素停下来了。

再后来，我就碰到了月旭的Ultimate® Polar-RP色谱柱。前一段才抽出了时间来重新分离β-胡萝卜素。（中间还有一个小插曲，我还考了大家一回呢，呵呵。详见http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120510/4025808/主题：【原创】【考考你】看图解答（答案在34#））

结果见图5和图6。

图5.  C= 75μg/ml

图6. C= 1.5μg/ml

这才是我心目中想要的分离结果！哈哈！



讨论：

1.      认识了月旭，终于把问题解决了，终于可以睡个好觉了。

2.      假如说，当初的设想可以实现，即维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来。对于制药行业来说，这样的质量标准的申报难度有多大？与分开来检测，优势哪个更明显？

3.      月旭和另一根色谱柱相比，保留时间缩少了可不是一星半点。这对于样品检验人员来说，绝对是一个非常利好的长处！

问题来了：同样是反相柱，为什么月旭的Ultimate® Polar-RP就比普通的C18有这么明显的优势呢？
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老多_小多
emoc98311
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2012/5/28 8:29:48 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来,但是β-胡萝卜素出峰太慢，峰形不好
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2012/5/28 9:07:06 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
峰形不好是不是和柱子有关系？
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冷冷的冰雨
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2012/5/28 9:08:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
第一个峰有溶剂峰嫌疑啊
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fengmo4668
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2012/5/28 9:34:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
维生素A和β-胡萝卜素一针可以检测出来,但是β-胡萝卜素出峰太慢，峰形不好

你说的应该是反相系统。
反相系统，维生素A的顺、反式无法正常分离。
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fengmo4668
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2012/5/28 9:35:38 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
峰形不好是不是和柱子有关系？


除了和柱子有关系，还是和柱子有关系。
特别是和保留时间的长短有很大的关系。
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2012/5/28 9:36:16 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
第一个峰有溶剂峰嫌疑啊


冰雨看的仔细！
所以，我只能放弃最初的设想了。
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2012/5/28 9:37:39 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 fengmo4668(fengmo4668) 发表:
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
峰形不好是不是和柱子有关系？


除了和柱子有关系，还是和柱子有关系。
特别是和保留时间的长短有很大的关系。


和流动相关系也比较大
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fengmo4668
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2012/5/28 9:42:23 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
原文由 fengmo4668(fengmo4668) 发表:
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
峰形不好是不是和柱子有关系？


除了和柱子有关系，还是和柱子有关系。
特别是和保留时间的长短有很大的关系。


和流动相关系也比较大

是的，也有关系。
因为流动相的组成是决定保留时间长短的主因。
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dahua1981
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2012/5/28 9:54:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
恭喜风魔又发一篇力作
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fengmo4668
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2012/5/28 10:18:47 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
恭喜风魔又发一篇力作


这一篇大家应该早就有心理准备了吧。
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