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主题：【讨论】再话ODS-3 C18色谱柱是否可以用二氯甲烷冲洗？

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reagentlife
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发表于：2012/07/12 15:37:37 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
某用户做糕点等食品中的防腐剂（山梨酸、苯甲酸、糖精钠），流动相是0.025mol乙酸铵水溶液/甲醇（70:30），用的是ODS-3的色谱柱，试验做完后，用95%水/5%甲醇冲洗1个小时，用甲醇冲洗20分钟，再用二氯甲烷冲洗半个小时，1.0ml/min。

用户最开始没有用二氯甲烷冲洗，后来听Waters的技术和其他同行介绍说做完实验以用二氯甲烷冲洗一下，可以去色谱柱里的蛋白质，刚开始（用的是天津某品牌的二氯甲烷）压力是正常的，3个月后(改用我们的二氯甲烷)压力从开始的100多psi升到2000psi，后来压力太高把色谱柱PEEK接头裂开了，就用0.2ml的甲醇冲了一晚上，压力还是在3300Psi，色谱柱严重堵塞。

请大家帮忙分析下有哪些原因导致用二氯甲烷冲洗色谱柱后柱压上升了？另外，做防腐剂山梨酸、苯甲酸、糖精钠等的C18柱的使用寿命一般有多长？（ps：我听说这个实验很废色谱柱的，因为在前面处理沉淀蛋白过程中需要加入乙酸铅或者乙酸锌+亚铁氰化钾，请大家帮忙分析下导致色谱柱柱压上升的原因）。
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2012/7/12 19:49:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好像测三聚氰胺的方法也用乙酸铅沉淀蛋白质啊？柱子寿命还可以。

柱压高可能是筛板堵了。
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vcningmeng
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2012/7/13 9:15:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
筛板堵的可能性不是很大，如果安捷伦的仪器，有过滤白头，岛津仪器里面也有过滤片的，都是0.45UM的，不太可能堵了筛板。
个人觉的冲了甲醇以后，直接换到二氯甲烷问题多多，甲醇和二氯甲烷虽然是互溶的，但溶解性比较差，正确的应该是甲醇冲了以后--异丙醇过渡--二氯甲烷冲洗--异丙醇过渡---甲醇冲洗
Waters专家应该不会连这样的常识都不知道，个人倾向客户可能忘记了异丙醇过渡的步骤了
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reagentlife
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2012/7/13 12:12:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
下面是岛津技术人员给出的建议

不知道样品中的蛋白质有多少，如果很多的话，二氯甲烷和蛋白质会发生质变，估计这根柱子已经用不成了。

1， 如果是很微量的蛋白质的话， 以下这个步骤结束后就可以了。因为很微量蛋白质不会造成很大的影响。

  [ 95%水/5%甲醇（1ml/min，冲洗1小时）冲洗完后，再用100%甲醇（1小时）冲洗，保存。]

2，如果想清除柱子中的蛋白质的话，一般可以使用两种方法；

  1） 使用碱性溶剂来溶解蛋白质。 比如；0.5% 的NH3.

      但是，使用碱性溶剂的话，pH会增高，柱子是ODS的话，硅胶也会随之融化，导致柱子受损。

      所以一般我们不建议。

  2） 使用高浓度的缓冲溶剂。 比如； 1mol的盐类  之后使用100%水 =〉 50% 有机溶剂 -〉100% 有机溶剂  保存。

  常理上来讲，如果目的样品不是蛋白质的话，在进LC之前，前处理的时候会除去蛋白质。


3，使用二氯甲烷来冲洗柱子，也是有的事情，但是一般不是很多。

  柱子里面进入非亲水性强，非极性化合物的时候，使用二氯甲烷来清洗。

  但是由于二氯甲烷具有挥发性，所以清洗之后需要使用中性溶剂来置换，比如；100% 的IPA (异丙醇） -〉 100% 甲醇 保存。
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vcningmeng
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2012/7/13 12:53:25 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看了一下，岛津技术人员的建议是合理的
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hnteng
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2021/12/23 15:53:32 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
二氯甲烷有一个重要特点：可溶解PEEK管。经常用这个冲，PEEK管的材料溶解后进入了色谱柱，不堵才怪。
此外，四氯呋喃也可溶解PEEK管。

  这个溶剂少量的用不是不可以，但所以接头都得是不锈钢的。PEEK的切忌用含卤素的溶剂。

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