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主题：【求助】菌种传代问题

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xin351661709

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发表于：2012/08/21 09:54:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般工作菌种从几代开始一代二代用于无菌试验吗

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2012/8/27 9:28:36 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果你买回来的是冷冻干燥菌种，就是0代，接种培养出来的斜面或者菌液就是1代。一般来说，药检所不会卖1代的菌株给你，因为这个时候的菌株还很弱，而且刚从冻干粉里面接种出来还不知道能否成功成活，再就是冻干粉不可能接种出来很多管斜面。再接种出来的2代菌株，就比较强壮了，可以用作菌种的保藏传代。第 3代菌株的活力已经达到正常状态了，这个时候就可以作试验用菌液了。所以，药检所卖给你的至少是第2代以上的菌株，具体多少代就要问他们了。个人建议向中检所定购冻干菌株，自己接种，按照中检所马老师他们介绍的方法，在第2代时用100ml肉汤培养，再加入100ml40％甘油混匀，用冻存管分装成 1ml/支，共50支，保存在－20至－80摄氏度，可保存1年，每周拿一支出来用。

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2012/8/27 9:29:20 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果是第一代，首先就是传代。

方法1、接到100ml营养肉汤培养24小时，加入100ml40%甘油，分装50支冻存管，－20至－80摄氏度保存，保存期1年，每周开1支，随用随拿。推荐。

方法2、接种到5支琼脂斜面上（是什么培养基的斜面看菌种定，注意这里是第2代了），1支留着传代，另外4支每周开一支，接种到肉汤或者斜面上，就是第3代了，可以直接稀释菌液使用了。不过这里不好的是，留着作菌种的传代次数不能超过5代。超过以后需要复壮和重新鉴定菌株，比较麻烦。

注意：黑曲霉不采用上面的方法。黑曲霉可以等长出孢子后洗脱制成孢子悬液，直接保存在-4度，可以保存至少半年（国外厂家的规定，国内有人保存超过半年的，可以自己验证后使用）

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