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主题：【求助】新柱高浓度样品时峰分裂

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ianzeng177
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发表于：2012/09/11 17:09:29 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
新买的waters XBridgeTM Shield RP18（规格：4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，柱温30℃；以0.02mol/L磷酸氢二钾溶液-甲醇-乙腈（30:20:50）为流动相；流速为1.0ml/min，检测波长为210nm。进样50微升。
样品1： 浓度4mg/ml


样品2：样品1取1ml至100ml量瓶中，乙腈水稀释至刻度。即浓度0.04mg/ml

样品3：对照品0.8mg/ml


开始怀疑是不是样品的问题，就用了一根旧的相同型号规格的色谱柱，进了样品1，结果并没有分裂：


    新柱中高浓度的3个峰的面积和正好约等于旧柱的一个峰，也进了空白，并不是干扰的问题。

    现在只有怀疑这根新的柱子可能有问题，但是为什么低浓度的时候峰形很正常，高浓度就变成3个峰了呢？
    求助各位高手，这是什么原因啊？希望大家能集思广益，多谢！好几千大洋的新柱子啊~~
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2012/9/11 19:16:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、waters XBridgeTM Shield RP18 碳链载量没有一般的C18的高，明显此柱容易过载，对比0.8mg/ml和4mg/ml的图可知；
2、此柱的优势是耐高水相，对极性物质的保留会增强，因此与其他的C18相比，出峰顺序会可能有部分颠倒，对比最后两张图，你的杂质的出峰时间明显后推；
3、C18有含碳量低中高三种类型，这三种柱子的保留行为差异较大，要针对你的分析物的性质来选柱子，不光要看品牌，还要看的系列，不同系列的优劣各异。
该帖子作者被版主 zhonghuashendun加 3积分， 2经验，加分理由：欢迎应助
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dark_wzy
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2012/9/12 16:35:06 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道楼主用何种溶剂溶解的样品？样品貌似在死时间出峰，怀疑有较强的溶剂效应。另外，样品浓度太高，而且进样量也太大，估计会过载。
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mslab12
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2012/9/13 14:24:59 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子选择性 区别很大的，毕竟填料是不一样，
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秋醉虞阳
wangjianhua1102
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2012/9/13 14:37:14 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不同公司同类别的柱子差异也比较明显，新柱需要按规定冲洗后才能使用。
样品过载会造成图谱比较难看。结果是没有分裂但是出现拖尾现象。
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ianzeng177
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2012/9/13 16:26:26 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品是用纯乙腈溶解的，是做有关物质检查，样品1是供试品，样品2是1%自身对照，所以样品1的浓度比较高。
    这个分析方法是成熟的方法，第一张图和第四张图是同一个样品，都是用的 XBridgeTM Shield RP18的柱子，只不过图1用的是新柱，图4用的是旧柱子。另外一个区别就是新柱是在国内买的，旧柱是在美国买的。但是外包装和说明书都是一样的，除了批号不同。
    waters的人让试试中间浓度，2mg/ml的样品，我再试试看吧。
    这是奇了怪了。。。
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ianzeng177
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2012/9/21 16:42:21 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
浓度为4mg/ml的样品，分别进样50μl，40μl，30μl，20μl，10μl。信号1-5分别对应进样量50μl~10μl。


可以看到主峰的峰高未见明显变化，但是前面的不知道什么峰逐渐回归正常。10μl时峰形正常。
目前原因仍是未知。
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安平
byron1111
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2012/9/23 12:10:10 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
溶剂是什么？

好像是溶剂太强
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2012/9/23 20:17:37 Last edit by byron1111
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