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主题：【原创】不使用kit：手工提取酵母DNA的方法

浏览0 回复4 电梯直达
biolabware
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发表于：2012/09/21 10:41:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1) 使用YPD培养基10ml酵母菌30℃培养过夜；

2) 离心收集细胞，离心管放置冰上，轻轻倒出上清液，用0.5ml水重悬沉淀。转移细胞悬液至1.5ml罗盖管内，再次离心收集细胞沉淀；

3) 轻轻倒出上清液，在振荡器上剧烈震荡使残余的液体重悬细胞沉淀；

4)加入 0.3 ml Solution C: 2% TritonX-100, 1% SDS, 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8), 1mM EDTA；

5) 加入 0.3 ml 酚：氯仿；

6) 加入酸化玻璃粉或锆珠，液体会高于玻璃粉2-3mm处，使用漩涡振荡器破碎细胞；

7) 加入0.2 ml TE (pH 8.0)溶液，震荡15秒，确保混合均匀；

8) 13,000 rpm 离心5分钟，转移上层液体至新离心管（原离心管应弃置于苯酚中）；

9) 吸取水状层至新离心管，加入1ml 100%乙醇，反复颠倒混匀，于-20°C 放置30 分钟；

10) 13,000 rpm离心10 min, 弃去上清，用0.4ml TE重悬沉淀（此时含有大量的RNA，TE溶液中加入3µl 10mg/ml RNAse A溶液；

11) 于37°C孵育15分钟，加入10µl 3M 醋酸盐（pH 5.2），混合均匀，加入1ml100%乙醇，反复颠倒混匀

12) 13,000 rpm 离心10 min，弃上清，风干沉淀，用70%乙醇洗涤，再次离心去除乙醇，风干用 50 µl 水重悬。

至此结束，最终DNA浓度能达0.5 µg/µl。

作者后记：本秘籍迅速在本实验室以及其他酵母小组流传开来，从此江湖上又多了一个方便、强大、回收率高的DIY传说！
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jackcong
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2012/9/21 13:18:41 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个方法有没有验证过？
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richies
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2012/9/21 16:43:18 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酵母提DNA?

俺以前都是提RNA,然后水解,提核苷酸

MS木有那么复杂吧....
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tdwinner
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2012/11/10 12:49:40 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不清楚好坏 可以参考
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richies
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2012/11/11 14:35:33 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有时间找个实验室验证下这个方法
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