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主题：【讨论】碱性蛋白和酸性蛋白对于SEC的蛋白柱的分离有影响吗？

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histone1
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发表于：2012/10/11 17:51:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
比如说，buffer pH是7.0

蛋白A的PI是3，蛋白B的PI是11，那么一个带正电，一个带负电，色谱柱对于两者的分离会有区别吗？
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2012/10/11 20:16:28 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没用过这样的色谱柱，先查阅相关文献吧。
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vcningmeng
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2012/10/12 9:02:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 histone1(histone1) 发表:
比如说，buffer pH是7.0

蛋白A的PI是3，蛋白B的PI是11，那么一个带正电，一个带负电，色谱柱对于两者的分离会有区别吗？

个人觉的应该没有多大区别吧，SEC的分离模式是不是以分子排阻为主要模式？
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histone1
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2012/10/12 9:23:41 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对，理论上来说没有影响。

可是实际呢？再比如一个PI=7的蛋白，在pH4.0和pH9.0的buffer中，保留体积是一样的吗？
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2012/10/12 9:41:04 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 histone1(histone1) 发表:
对，理论上来说没有影响。

可是实际呢？再比如一个PI=7的蛋白，在pH4.0和pH9.0的buffer中，保留体积是一样的吗？

说实在的，对蛋白这块不熟悉，个人觉的即使buffer有变化，但对于蛋白空间大小的影响会不会很大？？？如果不是很大的话，我觉的对分离没有太大影响，毕竟对于体积排阻来说，是不是分子量需要相差一倍以上，才会有比较好的分离？
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histone1
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2012/10/12 11:17:11 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对，对于结构影响应该不大。可是对于带电性能有很大影响，蛋白柱的填料基质对于不同电荷的蛋白会有吸附吗？

或者这么说吧，大部分蛋白是酸性蛋白，等电点小于7，pH7.0的缓冲液中带负电，色谱柱说明书里的标准蛋白也是这类蛋白。

可是对于那些等电点大于7的碱性蛋白来说，pH7.0下带正电荷，蛋白柱对于碱性蛋白的分离效果如何？

虽然有些蛋白柱的应用案例也有碱性蛋白，但是实际上，我用同样的条件做下来，结果的并不好。
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mingmingtong
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2012/10/14 19:50:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以去查阅文献啊
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