主题:【分享】实验室常用技术参数——常用酶的配制

浏览0 回复1 电梯直达
省部重点实验室
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
常用酶的配制

  1.溶菌酶

  用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。

  2.蛋白水解酶类



 


贮存液


贮存温度


反应浓度


反应缓冲液


温度


预处理


 


0.01mol/L Tris(pH7.8)


 
链霉蛋白酶a

20mg/ml


-20℃(溶于水)


1mg/ml


0.01mol/L EDTA


37℃


自消化b


 


0.5% SDS


 


 


0.01mol/L Tris(pH7.8)


 
蛋白酶Kc

20mg/ml


-20℃(溶于水)


50μg/ml


0.005mol/L EDTA


3756℃


无须预处理


 


0.5% SDS


 


  a:链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

  b:自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。

  c:蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA(以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+

  3.无DNA酶的RNA酶

  将胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中,配成10mg/ml的浓度,于100℃加热15min,缓慢冷却至室温,分装成小份保存于-20℃。

  四、常用抗生素溶液


抗生素

贮存液a

工作浓度

浓度

保存条件

严紧型质粒

松弛型质粒

氨苄青霉素

50mg/ml(溶于水)

-20℃

20μg/ml

60μg/ml

羧苄青霉素

50mg/ml(溶于水)

-20℃

20μg/ml

60μg/ml

氯霉素

34mg/ml(溶于乙醇)

-20℃

25μg/ml

170μg/ml

卡那霉素

10mg/ml(溶于水)

-20℃

10μg/ml

50μg/ml

链霉素

10mg/ml(溶于水)

-20℃

10μg/ml

50μg/ml

四环素b

5mg/ml(溶于乙醇)

-20℃

10μg/ml

50μg/ml



  a:以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

  b:镁离子是四环素的拮抗剂,四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。
该帖子作者被版主 zhang88268572积分, 2经验,加分理由:鼓励分享
为您推荐
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
nphfm2009
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
品牌合作伙伴