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主题：【第六届原创】成功的RNA提取需要小心翼翼吗？

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nkwinter
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发表于：2012/12/13 20:02:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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提过RNA的童鞋们都知道RNA容易降解，在提取过程中有很多注意事项，大多数人在提取RNA的过程中也都是小心翼翼。我也曾讲过我同学和我师姐提取RNA的经历，但是，成功提取RNA真的需要那么小心翼翼吗？答案是否定的，我获得这个答案是因为在后来的实验中我遇到了一个提取RNA的达人。

我要提取的植物样品，多糖特别多，按照常规的trizol方法提取根本就提不出来任何的RNA，用普通的试剂盒也是不行，研磨完的样品离心都没法离下去，别说提到RNA了。那时候，试验又是不得不做的，一时愁的不行。后来有人给我介绍了一个提取RNA特别牛的人，我就去找他帮忙，当时是说做技术服务，一个样品要500块钱呢。贵是贵了点，抱着试试看的态度也就同意了。

他提取的时候，我去学习了一下，真的是受益匪浅。我是一个但凡有简便方法就决不用麻烦方法的人，自从跟他学习了之后，我提RNA开始变得豪爽起来，并且提取的成功率也相当高了。好了，具体的说说他是怎么提取RNA的吧！

首先，研磨用的研钵不用烧了消毒，理由是RNA非常容易降解，RNA不可能完整的存在在研钵里。加trizol时可以不用戴手套，也不用处理过的枪头，因为trizol本身就可以抑制Rnase的作用，不可能导致RNA降解。用酒精洗的时候也不用小心，因为酒精也可以抑制Rnase的作用，保护RNA不被降解。只有最后一步用DEPC水重悬RNA的时候才需要特别注意，因为只有这一步RNA没有了保护剂，需要用处理过的枪头和EP管。这样呢，RNA就可以很轻松的成功提取了。

最后一步就是检查一下提取的RNA的质量，那就是要电泳了。电泳还是需要非常注意的，因为电泳的过程中RNA是会降解的，如果不用DEPC处理的电泳液和凝胶，那也一定要换新的电泳液，并制备一块比较薄的胶，电泳的电压可不能过快，否则RNA也会降解的。我就曾经有过电泳电压过快也没有用处理的电泳液电泳，什么也跑不出来的经历，后来才发现原来是电压过高的缘故。

就写到这吧，一点点小经验，分享给大家一下。
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2012/12/13 20:13:48 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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