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高效液相色谱法检测瘦肉精方案
近年，国内又发生“瘦肉精”食物事件引人注目。据悉，瘦肉精是一类动物用药，有数种瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。猪食用后可大量吸收并大量沉积于肝、肺、肾中却不会中毒，而且还促进猪的骨骼肌(瘦肉)蛋白质合成和减少脂肪沉积。但是人体摄入较多“瘦肉精”后，会出现头晕、恶心、手脚颤抖、心跳，甚至心脏骤停致昏迷死亡等严重后果。据相关专家介绍，目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。现在主要采取的检测方法是高效液相色谱法（HPLC），优点是检测精确度高，灵敏度高，假阳性率低。
下面就介绍下瘦肉精--盐酸克伦特检测
盐酸克伦特罗结构式：
瘦肉精猪肉
实验部分
1.试剂
①盐酸克伦特罗标准品
②乙醚；分析纯
③正己烷：分析纯
④甲醇：色谱纯
⑤lmol／L盐酸溶液
⑥0．05mol／L乙酸缓冲液
⑦0．3mol／L乙酸缓冲液
⑧lmol／LNaOH溶液
⑨纯净水
2.仪器及设备
①高效液相色谱仪（配紫外检测器）
②匀浆机
③旋转蒸发仪
④电子天平：0.1mg
⑤离心机（10000r／mln以上）
⑥固相萃取装置
⑦固相小柱
3.提取和净化
取组织样品10g，加入30ml lmol／L盐酸溶液匀浆，超声波振荡3h，5000r／mln的速度离心10min，—上清液用lmo]／LNaOH溶液滴至碱性，乙醚或正已烷抽三3次，抽提液在水浴锅上蒸发至5ml后上Silioa小柱，以除去大部分杂质，洗脱液上Alu—mina A小柱，将待测成分吸附在小柱上，用0．05mol几乙酸缓冲液(pH7．0)洗涤小柱3次，o．3mol／L乙酸缓冲液洗脱待测成分，冷冻干燥，用0．5ml甲醇液溶解后取20uL供高效液相色谱仪检测。
4.色谱条件
色谱柱：Xtimate C18柱，250mmX4.6mm
流动相：甲醇—水(75+25)
流速：1.0ml／min
检测波长：245nm
温度：室温
进样量：20uL
色谱图：
5.测定
①标准曲线的制定，配置不同浓度的5个标样，按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析；
②样品测定，按上述测定步骤进行；
③空白试验，除不加试样外，按上述测定步骤进行；
④回收率实验，样品中加入一定量的标样，按上述测定步骤进行。
6.检测限、校正曲线系数和回收率
本方法在猪的肌肉和肝脏组织中的检测限为0．01mg/kg，校正曲线系数为0.9998，回收率范围为70％-110％。
据报道，市民在现实生活中可以通过以下方法辨别猪肉是否有“瘦肉精”嫌疑：
■对肉要“察其色，观其形”。“瘦肉精”肉，脂肪层薄，颜色特别鲜红，瘦肉纤维疏松，时有少量“汗水”渗出肉面；而正常猪肉，脂肪洁白，肉色较浅，外表微干，有弹性，不会有“出汗”现象；
■因为动物摄入的外来毒素、药物及其代谢产物，大多在肝脏富集解毒，建议不吃或少吃肝脏。
原文由 yu3226033(yu3226033) 发表:哦，是有哈
月旭公司推出动物组织中盐酸克伦特罗（瘦肉精）检测的全套解决方案。
具体测定方法如下：
1. 适用范围
适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物的检测。
2. 提取
将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2，待净化。
3. 净化
活化/平衡：依次向Welchrom® P-SCX（60mg/3mL）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液，流出液弃去；
上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去；
淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去，并将小柱抽干；
洗脱：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃下氮气吹干；
4. 检测
50% 甲醇溶解残渣，涡动振荡1 min,过0.22μm滤膜，装入进样小瓶，进样10μL分析。
色谱条件：
色谱柱： Ultimate XB-C18 液相色谱柱（4.6 mm x 150 mm, 3 μm）
流动相： 0.01 M磷酸缓冲液：甲醇=65:35
流速： 0.7 mL/min
进样量： 20 μL
柱温： 30 °C
检测波长： 244 nm
运行时间：11 min
5. 结果
回收率和重现性实验
将猪肝空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次
原文由 yu3226033(yu3226033) 发表:差不了多少，主要就是流速和流动相有些不同原文由 houjjun(houjjun) 发表:侯版比较下?原文由 yu3226033(yu3226033) 发表:不知道，可能有吧原文由 houjjun(houjjun) 发表:月旭公司提供过瘦肉精检测解决方案原文由 yu3226033(yu3226033) 发表:也是业余时间，随便弄一下原文由 houjjun(houjjun) 发表:放假还在搞原创很敬业.原文由 yu3226033(yu3226033) 发表:我们提前放假，昨天就放了，一共5天，哈哈
祝贺侯版放假前又发篇原创!
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