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液相色谱（LC）
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主题：求助:对这种流动相的解释

浏览0 回复10 电梯直达
riverling
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发表于：2006/06/07 17:11:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教一下,三乙胺做为流动相走HPLC是利用它的什么性质啊???
我们走一个样品,梯度洗脱用的是乙腈和三乙胺

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2006/6/7 17:18:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
明白一点但是不好说,
一是他的酸碱性
二是他的键合性
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riverling
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2006/6/7 17:19:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想听详细的,谢!!!!!!
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only-one
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2006/6/7 20:46:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看用量大小了，用量小的话可以用来调节PH值的，也可以用来扫尾！！！
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tianru的爸爸
lxdongzi2003
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2006/6/8 8:27:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 only-one 发表:
看用量大小了，用量小的话可以用来调节PH值的，也可以用来扫尾！！！

修正：可以改善拖尾现象。
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riverling
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2006/6/8 9:22:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家!!!
我用的是10mmol的量和ACN混合走梯度
为什么它能改善拖尾啊?以前我用的是0.1M Tris_Cl
但现在用三乙胺纯化后电泳鉴定,发现条带很散,不清晰.这是为什么啊,是不是样品中三乙胺影响的啊??请高手解释一下.
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tianru的爸爸
lxdongzi2003
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2006/6/8 10:34:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 riverling 发表:
谢谢大家!!!
我用的是10mmol的量和ACN混合走梯度
为什么它能改善拖尾啊?以前我用的是0.1M Tris_Cl
但现在用三乙胺纯化后电泳鉴定,发现条带很散,不清晰.这是为什么啊,是不是样品中三乙胺影响的啊??请高手解释一下.

反相色谱分离后样品，要进行电泳鉴定，需要彻底除去有机溶剂。
你是如何除乙腈的？
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riverling
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2006/6/8 10:52:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
哦,已经将样品用离心浓缩仪彻底抽干啦,
最后是用纯化水定量再取出来电泳的
是不是在浓缩这一步有影响啊??
是乙腈还是三乙胺
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制备液相
wzl-x
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2006/6/8 12:34:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的样品是碱性的吧,要电离的哦
加三乙胺可以抑制电离撒,就可以改善脱尾了!
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dboer
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2006/6/8 15:18:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
Tris缓冲盐在作为生化缓冲溶剂时，常用的缓冲范围是“中性”范围：
Tris-Cl的缓冲范围是pH＝7.5～8.5
Tris-磷酸盐的缓冲范围是pH＝5.0～9.0
你所用的三乙胺的缓冲范围是偏碱性的，而生化反应对“环境”要求较高，所以会出现不太好的现象。
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riverling
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2006/6/9 9:10:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
再次请教
我做的是核酸的纯化,合成的时候会产生很多失败的片断,要纯化出较纯的核酸.为什么走HPLC的时候不用0.1M Tris-Cl而用10mmol的三乙胺呢,为什么要用10mmol的浓度呢,其它的浓度不行吗??
三乙胺能改善拖尾时的浓度应该是多少??为什么??
三乙胺除了能改善拖尾还起到什么作用??
呵呵问太多了 问得实在是越来越糊涂了
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