主题：[资料] 紫外-可见分光光度计操作规程

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753型紫外可见分光光度计操作规程</B></td>

1.向右推开试样室盖，开显示箱电源开关，波段选择开关置于"T"，调节"0％T"旋钮，使显示器为"0.000".(53WB型如显示P1，即"T"未调0)。

2.光源电气箱电源开关向上，指示灯亮，钨灯开关向上，指示灯亮，溴钨灯亮。氘灯开关向上，指示灯亮，点燃开关向下2～3秒后迅速拨向上，指示灯亮，氘灯点燃。

3.用波长手轮选择波长，到位时的手轮旋转方向要固定，使用波长在200～350nm范围内，将光源转换手柄置于"氘灯"处，在350nm～800nm范围内，将手柄置于"钨灯"处。

4.检查T－A转换的精度：将波段选择开关置于"T"，池架第一孔置于光路，调节"100→0"旋钮，使显示为"1.000"；53WB型如显示P2即参比未调至100％。开关置于"A"应显示"0.000"，若有偏差用小改锥调节侧面"0A"。同理将"T"调到"0.100"，"A"应显示为"1.000"，若有偏差调节"1A"。再检查T＝0.500时，应有A＝0.301。

5. 狭缝尽可能选用2nm，或者用4nm。

6.向右推开试样室盖，放入待测的参比杯和样品杯，参比杯必须放在池架的第一孔内。再将盖向左推回用拉杆将参比液推入光路，波段选择开关置于"A"，调节"100→0"旋钮。使显示值为"0.000"用拉杆将样品液推入光路，显示值即为被测样品的吸光度"A"。

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UVPC操作规程

开机：
开机前确认电源是否连接、所连电脑是否开机；
打开仪器电源开关；
双击电脑桌面上UVPC图标或在开始菜单中找到UVPC图标并打开，等待仪器自检。

使用：
仪器自检结束后，在菜单“Acquire Mode”（测定模式）下选中所需的测定方式：“Spectrum”（光谱扫描）、“Quantitative”（定量计算）及“Time Course”（时间曲线扫描）。

1.Spectrum（光谱扫描）：
1.1 调节参数：
在菜单“Configure”中选中“Parameters”或用“Ctrl + P”调用参数表，选择所需参数。通常改动波长范围（Wavelength Range），修改扫描范围。点击“OK”，等待仪器调整至准备状态。
1.2 调整基线：
在样品槽及参比槽中放入调整基线溶液的比色皿，盖好上盖，点击“Baseline”，待仪器自动调整基线。
1.3 扫描谱图：
将样品槽中的比色皿中溶液换成被测溶液，盖好上盖，点击“Start”，待仪器自动测试完毕。完毕时会自动出现“Save”状态，点击“Save”。再在菜单“File”中选中“Save”或用“Ctrl + S”，将该光谱图存入所需位置及名称。

2.Quantitative（定量计算）：
2.1 调节参数：
在菜单“Configure”中选中“Parameters”或用“Ctrl + P”调用参数表，选择所需参数。通常修改测定波长值（Wavelength）。如需绘制标准曲线，可再选中“Concentration”项，修改其中的浓度单位，如：g/dl、mg/ml等；在测定范围中输入测定范围值，如0到100。如果样品做重复点，可在“Repetitions”项中选中重复数（但可选重复数不大于5）。点击“OK”，等待仪器调整至准备状态。
2.2 绘制标准曲线：
选中“Standard”项，至标准品测定状态。在样品槽及参比槽中放入调整基线溶液的比色皿，盖好上盖，点击“Auto Zero”。再将样品槽中的比色皿中溶液换成被测溶液，盖好上盖，点击“Read”，会自动出现“Edit Standard”状态，在浓度项“Concentration”中输入该溶液的浓度值。点击“OK”，仪器会自动记录并等待下一个标准品的测定。更换样品池中的标准品并遂一测定至全部标准品测定完毕。在菜单“File”中选中“Save”或用“Ctrl + S”，将该标准曲线存入所需位置及名称。
如用以前绘制的标准曲线，可在菜单“File”中选中“Open”或用“Ctrl + O”，将所要调用的标准曲线打开。注意文件类型“List Files of Type”；如需查看该标准曲线的参数，在“View Parameters”项前方框中打钩，就可以看到该标准曲线的参数。
2.3 测定样品：
选中“Unknown”项，将样品槽中的比色皿中溶液换成被测溶液，盖好上盖，点击“Read”，仪器会自动记录测定吸收值，同时根据标准曲线计算出对应的浓度值；仪器会自动等待下一个样品的测定。遂一更换样品池中的样品并测定至全部样品测定完毕。在菜单“File”中选中“Save”或用“Ctrl + S”，将该样品结果存入所需位置及名称。

3.Time Course（时间曲线扫描）
3.1 调节参数：
在菜单“Configure”中选中“Parameters”或用“Ctrl + P”调用参数表，选择所需参数。通常改动测定波长值（Wavelength）：修改测定波长；反应时间（Reaction Time）：修改反应时间；单位（Units）：可选小时、分钟或秒（默认的是秒）。点击“OK”，等待仪器调整至准备状态。
3.2 调整零点：
在样品槽及参比槽中放入调整基线溶液的比色皿，盖好上盖，点击“Auto Zero”。
3.3 扫描谱图：
将样品槽中的比色皿中溶液换成被测溶液，盖好上盖，点击“Start”，待仪器自动测试完毕。完毕时会自动出现“Save”状态，点击“Save”。再在菜单“File”中选中“Save”或用“Ctrl + S”，将该光谱图存入所需位置及名称。

关机：
1.将比色皿中的溶液到尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，将比色皿保存在保存液中；将仪器外盖盖好。
2.退出UVPC操作系统，关闭UVPC仪器。

注意事项：
1.测定紫外波长时，需选用石英玻璃的比色皿。
2.如要对光谱图进行加减乘除、求导求对数、顶点及定点得数据、峰面积得计算等，在菜单“Manipulate”下处理。
3、测定时，如有溶液溢出或其它原因将样品槽弄脏，要尽可能及时清理干净。

问题处理：
1、如果仪器不能初始化，关机（电脑及UVPC）重启；如不成功，查看说明书；
2、如果数据或谱图波动大，依次检查：调零是否正确（重新调零）、狭缝宽度是否过窄（加大狭缝宽度）、参比样值是否过大（如果吸收值大于2.0，可能会出现波动大）、光源是否有误（必要时，更换光源）。
3、如果基线不能平整，依次检查：调零是否正确（重新调零）、扫描速度是否过快（改“Fast”扫描为“Medium”扫描或更低）、波长范围是否过窄（扩大扫描波长范围）、比色皿是否更换（如更换，则重新调零）。
4、如果吸收值异常，依次检查：波长设置是否正确（重新调整波长，并重新调零）、测量时是否调零（如被误操作，重新调零）、比色皿是否用错（测定紫外波段时，要用石英比色皿）、样品准备是否有误（如有误，重新准备样品）。