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液相色谱（LC）

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主题：【第六届原创】qingqingcao老师讲HPLC(之三)，高效液相色谱泵和进样器性能判断

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qingqingcao

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药物分析发表于：2013/07/08 16:28:33 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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维权声明：本文为qingqingcao原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

摘要：本次课主要讲授HPLC泵流量准确性测试，自动进样器吸取溶液准确性测试，目的是为了让同学们懂得，如何用简单的方法判断HPLC性能是否好。

关键词：泵流量，准确性，进样器

引言

俗话说的好：工欲善其事，必先利其器。磨刀不误砍柴工。我们的仪器设备在好的状况下，才能够发挥出其最好的本质。同时，今天的讲课，也让同学们熟悉一下HPLC，色谱柱。同时，让同学们知道如何判断HPLC泵流速准确性，自动进样器进样准确性，HPLC色谱柱柱效判断。因为一般的仪器分析教材不会介绍这些内容，然而，这些内容确实在实际工作中很重要，所以，qingqingcao老师今天着重讲这些方法，希望同学们能够喜欢并且掌握。

注：全部的课程都是以RP-HPLC为对象，所以，用到的流动相都是水系-醇系，水系-乙腈系等。不涉及正相色谱。

1.泵流速准确性测试

泵在前一课上讲，主要起到动力作用，通过设定泵流速，让流动相以一定并且稳定的流速输送流动相。假设我们设定的流速是1.0ml/min，那么流动相是否以1.0ml/min流速流经色谱柱呢。判断这个，我们就需要对HPLC泵做泵流速准确性测试。

首先给出大致的概念和方法。

流量准确性高效液相色谱仪器流量准确性，用纯水，以1ml/min流速收集5分钟，称取其质量，换算成当时温度的体积，计算其流速准确度。

F_S——设定值，比如设定1.0ml/min

F_m——测量值。

S_s——设定值误差。

首先，我们想像，为什么用纯水？

因为纯水方便得到，而纯水不容易挥发，同时纯水的密度在各个温度下是已知的。但是，在这里，我想和大家指出的，不同的溶液其粘度不同，所以，如果输送醇-水系的，一般可以以纯水所代表的泵流速表示。而如果流动相是醇或者是乙腈，异丙醇等，准确地测试泵流速用相应的流动相。如果不需要很准确，可以用纯水代替。

我用几个词来概括一下如何来测试泵流量准确性

1) 换流动相为纯水

2) 拆下色谱柱，让进色谱柱的那接口流着溶液，调节设定值1.0，1.5，2.0ml/min。

3) 称空容量瓶质量。m 1

4) 接水并计时5.00min。

5) 称接水容量瓶质量 m 2

6) 查水温，并查出体积，

7) 计算5分钟流出的水的体积（ml）

8) 计算流速（ml/min）

9) 计算设定值测定值误差。

给一个例子。

我设定泵流速为1.0ml/min，测定泵流速准确度。首先称容量瓶为29.6589g，以此流速，接水5.00分钟，再次称容量瓶（盖盖子），其质量为34.6664，查的当时的水的温度是24.5℃。查的该温度下水密度为：0.997170g/ml。计算设定值误差。

我们如此解

Δm=34.6664g-29.6589g=5.0075g

V=5.0075（g）÷0.997170（g/ml）=5.0217ml

Fm=5.0217ml÷5.00min=1.004ml/min

Ss=（1.004-1.00）÷1.00×100%=0.4%

答曰： 1.0ml/min流速下其设定值符合要求。

当然，对于测试需要多次测试，多流速测试，在此，我只是介绍方法。还有需要在多次同一个流速测试，判断泵流量稳定性，我给出思路。也就是说，在同一个流速下，我测定n次（n≥3），选取最大流速，最小流速，和平均流速，计算在此设定流速下的泵流量稳定性。

2. 进样器进样准确度测定

进样器进样准确度的思路是一样的。也是通过设定和称重方法。我给出例题。

例如：测定自动进样器吸样准确性测试。自动进样瓶装80%高度的纯水，称得其质量为5.6412g，其纯水温度为24.5℃，密度为0.997170g/ml。设吸取量为50μl。连续吸取20次，擦干外壁的水汽，天平称得为：4.6325g。

解：Δm=5.6412-4.6325=1.0087（g）

V=1.0087÷0.997170=1.0116（ml）

20次，那么一次体积为

1.0116×1000(μl)÷20=50.58（μl）

答曰：进样器的进样体积为50.6μl。

如果是这样的话，很遗憾，需要叫工程师来调节下进样器了。

结语

今天主要讲了泵流量准确性测试，自动进样进样准确性测试。这两个方法都是使用纯水，天平等简单的设备，而且能够做出比较准确的结果，这是HPLC性能准确性中最重要的两个指标。当然，还有检测器波长准确性测试，高效液相色谱柱好坏判断。这两个内容将在下次讲授。敬请期待。

qingqingcao 老师讲HPLC（之一）， “技”、“道”之辩
qingqingcao 老师讲HPLC（之二），高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱的构成[/url]
qingqingcao老师讲HPLC（之三），高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱泵和进样器性能判断[/url]

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2013/7/8 16:52:04 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这里，我想和各位同道朋友们说明下：

首先，我确实是老师，中等职业学校的新老师。用qingqingcao老师，只是一个文学性的表述。没有那种权威专家的意思，而是一种启发新手意思。同时青青草老师，觉得很可爱。

我从事仪器行业十多年了。主要从事HPLC方法学开发，色谱柱装填，仪器维护维修等等。我在这里发原创，主要是想整理下我之前的工作经验。对于HPLC是我22岁大学毕业时候就开始玩的，也得到了许多朋友的指点，在仪器信息网上，阅读了不少材料，向前辈们致谢。也因为，我最近不玩HPLC多年，所以许多思维只是停留在5年前，所以，我在写作中，难免会有自己主观的东西，跟不上时代的东西。

再次，我希望同志们能够找出我的错误，我会虚心修改。

我的本意只是推广，能够抛砖引玉，让新手们能够快速懂得HPLC，书本上的知识，确实在考试中是重要的，但是，工作中，可以把我的东西看看，如果有助于新手提高，我也是积功德了。

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2013/7/8 16:54:46 Last edit by qingqingcao