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透射电镜（TEM）
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主题：求助：小鼠囊胚透射电镜样品制备

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zhuomuniao
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发表于：2006/07/20 16:40:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
俺是个新手，老板刚给定下来课题，做小鼠囊胚的免疫电镜，有没有同仁做过，小鼠囊胚这么小怎么固定，脱水，包埋。很愁人，给点建议，帮帮俺吧，谢谢！
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shxie
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2006/7/20 20:11:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你要自己做样品？这个很复杂的，看看这个帖子:
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20051024/259808/
还有翻翻本版子版“样品制备”里面的帖子，也有几个好资料。
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zhuomuniao
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2006/9/22 15:50:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
太感谢了！请多多指教。
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zhuomuniao
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2006/9/22 16:06:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我还有一个问题：因为室做小鼠囊胚的透射电镜，囊胚外面还有一层致密的透明带，不论是固定还是脱水，渗透，都有一定的难度。我开始想用Epon812包埋剂包埋胚胎，但感觉他的黏度太高了，聚合时间太长了。所以我想改用Spurr包埋剂包埋，他黏度低，渗透快，聚合时间多。价格也低。各位同仁：我这样想合理吗？ 请赐教！！
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kutoku
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2006/11/8 14:57:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主您好，关于EPON 812与SPUR树脂的优缺点比较，我认为spur树脂的渗透的确要优于epon 812,但是spur树脂很脆，在修块的过程中极易因为受力不均匀而造成崩裂，在切半薄时也发生过此类事件。而epon 812就好多了，不管怎么折腾都没有崩裂导致样品丢失，所以我个人还是喜欢epon 812更多。其实您说的胚囊外面的致密透明带较之植物细胞的细胞壁而言还是要容易渗透些，可以在样品前固定的时候作抽气处理，我们就是直接用大的注射针筒抽，能用肉眼看到样品中有大量的气泡被抽出来，抽气的次数及程度与您的实验材料有很大的关系，动物组织应该要轻柔点，次数少一点，以免造成一些腔状部位的收缩变形。在用丙酮脱水的时候，我们也会在10％－30％中再抽气一次，不完全树脂和完全树脂的更换次数也增加一次，这些都是为了树脂能更好的渗透到样品里面，其实只要前期的固定，脱水做好了，树脂的类型并不会造成很大的影响，不知道这些对您有没有用
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zhuomuniao
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2006/11/8 15:09:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
太好了，谢谢你。请问你是电镜实验室的工作人员吗？我还有很多问题要请教。可不可以留下您的联系方式？十分感谢！
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2006/11/8 15:46:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
812的硬度较高，但是容易吸潮。
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kutoku
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2006/11/10 9:57:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
放在干燥器里面啊，我们有的时候还会把材料再用60度烘箱烘烤一段时间，一般你要切片的时候再从干燥器或者是烘箱中拿出一个来切，短时间内材料吸潮是没有很大影响的
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2006/11/10 14:56:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢！那我就买 812了，我问了几位专家，也是说用812比较好。另外，在聚合的时候，有用37，45，60度分别24小时。也有直接在60度聚合36-48小时的。这两种方法哪一个比较好？请赐教。
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2006/11/10 15:03:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还有脱水剂的选择，是酒精好还是丙酮比较好？100%的丙酮或酒精 是不是最好也放在干燥其中比较好？
    关于洗涤样品用的缓冲液，是用PBS还用二砷酸钠缓冲液比较好？
    请赐教！
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kutoku
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2006/11/12 13:09:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
sigh~~~~~,这两天的网络实在是糟糕透顶了，想回贴都回不了。MM你说的聚合方式哪种较好，我回答不了，因为没有尝试过分段聚合：p 。一般我们在换完完全树脂之后会放置2～3天，中途再更换一次新鲜的完全树脂，还要把材料摆正，之后就直接放到60度烘箱里面聚合了，不知道分段聚合是不是对较损耗的材料好一些，等你实验完了再报告咯。清洗的缓冲液我们有用到两种， Tris-马来酸和二甲砷酸钠，具体的配方可能要再查一下书，不过以上所有的操作都是针对的植物材料，你要做的小鼠胚囊不知道能不能用同样的试剂最好再问一下其他的人，祝好运：）
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